Het berekenen van virustiters is een gecompliceerde manier om te zeggen dat een wetenschapper het aantal virussen in een bepaald monster telt. Voor het berekenen van virustiters infecteren wetenschappers platen van groeiende bacteriën met virusoplossingen in verschillende concentraties en berekenen ze het aantal virussen in de oorspronkelijke oplossing door de bacteriën te tellen die zijn gestorven als gevolg van de virale infectie.

Seriële verdunningen
Trek handschoenen aan, vul 10 kweekbuizen met 9 ml bouillon en etiketteer ze "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3," enzovoort tot "10 ^ - 10. "Deze buizen zullen worden gebruikt voor virale seriële verdunningen. Omdat virussen tot ongelooflijk hoge concentraties kunnen groeien, moet u ze verdunnen om ze effectief te kunnen tellen. Elke buis vertegenwoordigt een tienvoudige verdunning van het virus.

Neem 1 ml van de viruscultuur die u wilt titeren en breng deze over naar een buis met de naam "10 ^ -1" met een pipet. Meng de buis goed. Dit is uw eerste tienvoudige verdunning.

Neem 1 ml van de gemengde cultuur uit uw tube met het label "10 ^ -1" en breng deze met een nieuwe pipet over in de volgende tube met het label "10 ^ -2 . "Meng deze tube ook.

Ga door met dit patroon om een ​​reeks seriële verdunningen te maken. Je krijgt uiteindelijk 9 tubes van 9 ml en 1 tube van 10 ml. De virale ladingen in uw tubes worden verdund van 10 keer (uw eerste buis) of 100 keer (uw tweede buis) tot tien miljard keer (uw laatste buis).

Platen voorbereiden

Neem 10 tubes trypton zachte agar en 10 Petri-platen en geef ze een etiket dat overeenkomt met je seriële verdunningsbuizen.

Maak de doppen los zodat ze niet in het vuur komen en plaats je agarbuizen in een beker van kokend water. Hierdoor smelt de agar zodat je hem in Petri-platen kunt gieten.

Breng je tubes over naar een bad met warm water van minimaal 45 graden Celsius. Dit zorgt ervoor dat uw agar niet hard wordt in de buizen voordat u de kans krijgt om het in een petrischaal te gieten.

Voeg twee druppels bacteriekweek toe aan uw agar en meng het voorzichtig. Dit zijn de bacteriën die worden gedood, zodat u het aantal virusdeeltjes in een bepaalde oplossing kunt tellen.

Voeg 1 ml van elke seriële verdunning toe aan de bijbehorende agarbuis terwijl de buizen nog in het warme water zitten bad. Bijvoorbeeld, 1 ml van uw 10 ^ -1 seriële verdunning moet in de agarbuis met het label "10 ^ -1" terechtkomen.

Meng elke buis en giet elke buis in de Petri-plaat met het bijbehorende etiket. Hierdoor wordt een dunne laag agar aangemaakt die is geïnoculeerd met bacteriën en virussen in elke plaat. Laat de platen een nacht in een incubator groeien.

Titels tellen en berekenen -

Haal je borden uit de incubator en onderzoek ze. Je zou overal op de plaat bewolkte gebieden moeten zien waar bacteriën zijn gegroeid, behalve kleine duidelijke plekjes die plaques worden genoemd. Deze plaques zijn stukjes dode bacteriën en elke plaque vertegenwoordigt één virus.

Zoek een plaat met tussen 30 en 300 plaques en tel het exacte aantal plaques op die plaat.

Neem de aantal plaques op je bord en vermenigvuldig met 10. Als je 157 plaques telde, zou je 1570 krijgen.

Vermenigvuldig het aantal dat je in de vorige stap kreeg met het inverse van het getal op je verdunningsbuis. Als de geselecteerde plaat bijvoorbeeld de 10 ^ -5-plaat was, vermenigvuldigde u 1570 bij 10 ^ 5 om 157000000 te krijgen. Dit laatste getal is uw virustiter en vertegenwoordigt het aantal virussen per ml van uw oorspronkelijke cultuur.

Waarschuwing

Wees voorzichtig met virussen. Niet alle virussen zijn gevaarlijk, maar u moet voorzorgsmaatregelen nemen. Verander je handschoenen vaak. Veeg eventuele gemorste hoeveelheden onmiddellijk op en desinfecteer het gebied.