Biochemie bestudeert moleculen zoals DNA, RNA en eiwitten. Blotting-technieken zijn wat wetenschappers gebruiken om dit soort moleculen van elkaar te scheiden. In cellen bestaan ​​ze als een mengsel. Met blotting kunnen onderzoekers één eiwit uit vele vinden, zoals een naald in een hooiberg. Blotting wordt in het algemeen gedaan door een mengsel van DNA, RNA of eiwit door een plak gel te laten stromen. Met deze gel kunnen kleine moleculen sneller bewegen dan grotere. De gescheiden moleculen worden vervolgens tegen een membraan gedrukt, wat helpt de moleculen van de gel op het membraan te brengen. De moleculen kleven aan het membraan, maar blijven op dezelfde locatie, apart van elkaar, alsof ze nog in de gel waren.

Western Blot

Western blotting is een veel voorkomende techniek om te scheiden eiwitten naar grootte, maar in rechte kolommen. Met deze parallelle kolommen kunnen onderzoekers de hoeveelheid van een eiwit vergelijken tussen verschillende monsters die net naast elkaar worden uitgevoerd, zoals bowlingbanen. Als u bijvoorbeeld het effect van verschillende hoeveelheden van een geneesmiddel op de celgroei zou testen, zou u vier verschillende groepen cellen met een verschillende hoeveelheid geneesmiddel behandelen. Dan zou je de cellen open kunnen breken en de eiwitten van elke groep in gescheiden rijstroken op een gel kunnen laten lopen. Door de eiwitten op deze manier uit te spreiden, kun je zien wat een toenemende concentratie van medicijnen doet met een bepaald eiwit.

Northern Blot

Northern-blotting wordt gebruikt om RNA te detecteren. Cellen kunnen worden opengebroken om hun RNA vrij te maken. Het RNA van verschillende celtypen kan op afzonderlijke lanen op een gel worden uitgevoerd. De gel verspreidt het verschillende RNA naar grootte. Deze nette, parallelle rijen RNA laten een onderzoeker toe om te vergelijken welk celtype heeft hoeveel van welk RNA. Met deze methode kan een onderzoeker bepalen of cellen van een bepaalde ziekte meer van dit RNA of minder van dat RNA hebben. Northern-blotting kan onthullen hoe een ziekte op het niveau van RNA-productie werkt.

Southern Blot

Southern-blotting is de oorspronkelijke blotting-techniek, waarmee het naamgevingssysteem werd gestart. Het werd uitgevonden door Edwin Southern. De Southern-blot wordt gebruikt om de hoeveelheid DNA in een mengsel te detecteren. Net als met eiwit en RNA, kan het DNA van een cel worden vrijgegeven wanneer die cel wordt opengebroken. Southern-blotting scheidt DNA van verschillende celtypen op grootte. Het DNA van elk monster wordt verdeeld in nette, parallelle rijstroken. Individuele stukjes DNA kunnen worden gedetecteerd met behulp van een radioactieve of fluorescerende probe, die is ontworpen om alleen aan dat stuk DNA te binden. Het energiesignaal van een radioactieve sonde, of de lichtflitsen van een fluorescerend signaal, vertellen onderzoekers hoeveel van dat stuk DNA in elk monster zit.

Andere blots

De drie belangrijkste blotting technieken - westelijk, noordelijk en zuidelijk - zijn op verschillende manieren gemodificeerd om enigszins verschillende moleculen te detecteren. Elke aangepaste techniek wordt meestal op de gebruikelijke manier uitgevoerd, maar gebruikt een andere methode om het molecuul te detecteren dat in de parallelle rijstroken wordt verspreid. Zuidwestelijke blots detecteren moleculen van eiwit die aan DNA vastzitten. Noordwestelijke blots detecteren moleculen van eiwit die aan RNA vastzitten. Farwestern-blots detecteren moleculen van proteïne die aan andere eiwitten vastzitten.