De belangrijkste reden waarom u een monster bevlekt voordat u het onder de microscoop plaatst, is om het beter te kunnen bekijken, maar vlekken doet veel meer dan alleen de contouren van cellen benadrukken. Sommige vlekken kunnen celwanden binnendringen en celcomponenten markeren, en dit kan wetenschappers helpen metabolische processen zichtbaar te maken. Vlekken helpen ook onderscheid te maken tussen levende cellen en dode cellen. Bovendien maakt de kleuring het wetenschappers mogelijk om het aantal cellen van een bepaald type binnen een bepaalde biomassa te tellen. Er zijn twintig of meer verschillende soorten vlekken en elk heeft zijn doel.

TL; DR (te lang; niet gelezen)

Het belangrijkste doel van kleuring is het markeren van cellen en delen van cellen. Er zijn meer dan 20 verschillende soorten vlekken en het type vlek dat u gebruikt, is afhankelijk van wat u zoekt.

Soorten vlekken -

De keuze van de kleur hangt af van wat u zoekt. Niet alle vlekken zijn geschikt voor levende cellen, maar die zijn onder andere Bismarck bruin, tolueenrood, Nijlblauw en Nijlrood en bepaalde fluorescentiematerialen die worden gebruikt om DNA te markeren. Sommige vlekken markeren sporen, sommige detecteren lipiden en eiwitten en sommige kleuren veranderen in de aanwezigheid van zetmelen. Het doel van het onderzoek bepaalt het beste type te gebruiken vlek. Een arts die bijvoorbeeld een PAP-uitstrijkje toedient, zou Eosin Y gebruiken. Het is een zure fluorescerende kleurstof die rood kleurt wanneer deze in contact komt met rode bloedcellen, cytoplasma en celmembranen. Het wordt ook gebruikt om bloedmerg te testen.

In sommige gevallen kan een onderzoeker meer dan één vlek gebruiken. Hematoxyline is bijvoorbeeld een vlek die de celkernen blauw maakt. Bij gebruik in combinatie met eosine, dat de andere delen van de cel rood of roze kleurt, zorgt het voor een sterker contrast en worden de kernen gemakkelijker te onderscheiden. PAP-uitstrijkjes en bloedmergmonsters zijn gemakkelijker te onderzoeken wanneer deze twee vlekken samen worden gebruikt.

Gram-vlek: ziekenhuismedewerkers gebruiken Gram-vlek om schadelijke bacteriën te identificeren. Dit is eigenlijk een reeks kleurstoffen die verschillende effecten hebben op verschillende soorten bacteriën en artsen een belangrijk diagnostisch hulpmiddel geven. De kleurstof van Gram is een drieledig proces. In de eerste wordt Hucker's kristalviolet toegevoegd, waardoor alle bacteriën een uniforme violette kleur krijgen. In de volgende fase wordt jodiumkleuring toegevoegd, waardoor de kleur hecht aan Gram-positieve cellen, die voornamelijk stafylokokken en streptokokken zijn. De vlek wordt weggewassen, waardoor de Gram-positieve cellen met een duidelijke violette kleur achterblijven; vervolgens wordt een derde vlek, Safranine O, geïntroduceerd om het contrast tussen de gramnegatieve bacteriën en de rest van het materiaal in de glaasje te verbeteren.

Kleuringsprocedure

Bij het prepareren van een exemplaar op een dia, je kunt het droog monteren of nat monteren, je kunt het in een dun gedeelte snijden of smeren. Bij het gebruik van een beits, is de gebruikelijke procedure om het monster nat te monteren, wat betekent dat er een druppel water op de dia moet worden geplaatst, het monster in het water moet worden geplaatst en bedekt met een dekglaasje. Vervolgens brengt u de vlek aan op een hoek van de dia met een druppelaar en laat u deze door capillaire werking naar het preparaat toe trekken. Het helpt om een ​​papieren handdoek aan de andere kant van de schuif te plaatsen om het water aan te trekken. Nadat de vlek zich over de hele dia heeft verspreid, is het exemplaar klaar voor onderzoek.