Science >> Wetenschap >  >> Biologie

Onderzoekers:Hoe authenticeer je je niet-menselijke cellijnen?

Er zijn verschillende methoden voor het authenticeren van niet-menselijke cellijnen, elk met zijn eigen voor- en nadelen. Hier zijn enkele veelgebruikte methoden:

1. Morfologische analyse :Dit omvat het onderzoeken van de cellijn onder een microscoop om de vorm, grootte en groeikenmerken ervan te observeren. Hoewel morfologische analyse nuttig kan zijn voor het identificeren van algemene kenmerken van een cellijn, is deze niet altijd voldoende voor definitieve authenticatie.

2. Immunofenotypering :Deze methode maakt gebruik van antilichamen om de aan- of afwezigheid van specifieke oppervlaktemarkers of intracellulaire eiwitten te detecteren die kenmerkend zijn voor een bepaald celtype. Immunofenotypering kan worden uitgevoerd met behulp van technieken zoals flowcytometrie of immunocytochemie.

3. Karyotypering :Bij deze techniek wordt het aantal chromosomen en de structuur van een cellijn geanalyseerd. Karyotypering kan chromosomale afwijkingen of veranderingen identificeren die op besmetting of verkeerde identificatie kunnen duiden.

4. DNA-vingerafdrukken :Deze methode omvat het analyseren van de unieke DNA-patronen van een cellijn met behulp van technieken zoals short tandem repeat (STR) profilering of single nucleotide polymorphism (SNP) analyse. DNA-vingerafdrukken kunnen een hoge mate van discriminatie opleveren en worden veel gebruikt voor authenticatie van cellijnen.

5. Soortspecifieke PCR :Deze methode maakt gebruik van polymerasekettingreactie (PCR) om specifieke DNA-sequenties te amplificeren die uniek zijn voor de soort van oorsprong van de cellijn. Soortspecifieke PCR kan worden gebruikt om kruisbesmetting of verkeerde identificatie van cellijnen te detecteren.

6. Iso-enzymanalyse :Deze techniek omvat het analyseren van de elektroforetische mobiliteit van iso-enzymen, varianten van enzymen die verschillen in hun moleculaire structuur en functie. Iso-enzymanalyse kan worden gebruikt om cellijnverontreiniging of verkeerde identificatie te identificeren op basis van verschillen in iso-enzympatronen.

7. Mycoplasma-testen :Mycoplasma is een soort bacterie die celculturen kan besmetten en hun gedrag en experimentele resultaten kan beïnvloeden. Mycoplasmatesten zijn essentieel om ervoor te zorgen dat cellijnen vrij zijn van mycoplasmabesmetting.

Het is belangrijk op te merken dat de keuze van de authenticatiemethode afhangt van de specifieke cellijn en het vereiste authenticatieniveau. Voor sommige cellijnen zijn mogelijk meerdere authenticatiemethoden nodig om betrouwbare identificatie en kwaliteitscontrole te garanderen. Bovendien zijn een goede documentatie en registratie van het authenticatieproces cruciaal voor het behoud van de integriteit van de cellijnen en het garanderen van reproduceerbaarheid in onderzoek.