1. Nick vertaling:

* reactie: Deze methode gebruikt het enzym DNA -polymerase I om nucleotiden in een DNA -streng te vervangen door gelabelde nucleotiden. Het werkt door enkelstrengige pauzes (nicks) in het DNA te introduceren met behulp van dnase i . De polymerase gebruikt vervolgens de Nick als een primer en neemt gelabelde nucleotiden in de opening op.

* isotopen: Veelgebruikte isotopen zijn ³²P-DCTP of ³²P-datp .

* Voordelen: Produceert een hoge specifieke activiteit (labeldichtheid) en is geschikt voor zowel DNA met één als dubbelstrengs.

* Nadelen: Vereist een specifiek enzym en kan gevoelig zijn voor de bufferomstandigheden.

2. Willekeurige primer -labeling:

* reactie: Deze methode maakt gebruik van korte willekeurige oligonucleotide -primers en DNA -polymerase I (Klenow -fragment) om een nieuw DNA -streng te synthetiseren dat complementair is aan de sjabloonstreng. De polymerase bevat gelabelde nucleotiden tijdens de synthese.

* isotopen: Veelgebruikte isotopen zijn ³²P-DCTP of ³²P-datp .

* Voordelen: Efficiënt en kan worden gebruikt om zowel single- als dubbelstrengs DNA te labelen.

* Nadelen: Kan wat achtergrondlabeling introduceren vanwege de willekeurige primerbinding.

3. Eind-labeling met kinasen:

* reactie: Deze methode gebruikt polynucleotide kinase om een fosfaatgroep toe te voegen aan het 5 'uiteinde van een DNA -fragment. De fosfaatgroep is gelabeld met een radioactieve isotoop.

* isotopen: Typisch ³²P-ATP of ³³P-ATP worden gebruikt.

* Voordelen: Eenvoudig en eenvoudig, vooral nuttig voor het labelen van korte DNA -fragmenten.

* Nadelen: Labels alleen het 5 'uiteinde van DNA.

4. PCR -labeling:

* reactie: Deze methode omvat het gebruik van radioactieve DNTP's (zoals ³²P-DCTP ) Tijdens de PCR -reactie. Dit neemt het label op in de nieuw gesynthetiseerde DNA -strengen.

* isotopen: Veelgebruikte isotopen zijn ³²P-DCTP of ³²P-datp .

* Voordelen: Efficiënt en kan worden gebruikt om specifieke DNA -sequenties te labelen.

* Nadelen: Kan minder efficiënt zijn dan andere methoden en kan moeilijk zijn om een hoge specifieke activiteit te verkrijgen.

5. In vitro transcriptie:

* reactie: Gebruikt RNA -polymerase Om een DNA -sjabloon in RNA te transcriberen. Het RNA wordt gelabeld met radioactieve nucleotiden tijdens de synthese.

* isotopen: Typisch ³²p-utp of ³⁵S-utp .

* Voordelen: Kan sterk gelabelde RNA -sondes produceren voor hybridisatiestudies.

* Nadelen: Vereist gespecialiseerde reagentia en aandoeningen voor in vitro transcriptie.

De keuze van de etiketteringsmethode hangt af van de specifieke toepassing en de gewenste eigenschappen van het gelabelde DNA.

Opmerking: Het gebruik van radioactieve isotopen is de afgelopen jaren afgenomen vanwege de veiligheidsproblemen en de beschikbaarheid van niet-radioactieve etiketteringsmethoden. Radioactieve labeling heeft echter nog steeds enkele voordelen in bepaalde toepassingen, met name voor gevoeligheid en de mogelijkheid om lage overvloeddoelen te detecteren.