Biochemici en moleculaire biologen gebruiken elektroforese om macromoleculen zoals eiwitten en nucleïnezuren te scheiden. Hierdoor kunnen wetenschappers afzonderlijke eiwitten of nucleïnezuursequenties in een complex mengsel isoleren en analyseren. Een typisch voorbeeld van elektroforese in het laboratorium is een microbioloog die Polymerase Chain Reaction (PCR) gebruikt om DNA-fragmenten te scheiden die in een microbiële gemeenschap zijn geproduceerd. Ongeacht het doel vereist elektroforese altijd het gebruik van een bufferoplossing.

TL; DR (te lang; niet gelezen)

Elektroforese scheidt macromoleculen zoals proteïne en nucleïnezuren op grootte, Voor elektroforese die zich scheidt door lading, gebruiken wetenschappers buffer om die lading door de gel over te brengen. Buffer handhaaft ook de gel op een stabiele pH, waardoor veranderingen die kunnen optreden in het eiwit of nucleïnezuur indien blootgesteld aan onstabiele pH worden geminimaliseerd.
Principes van elektroforese

Elektroforese scheidt moleculen langs een gradiënt op basis van hun grootte, Die gradiënt kan een elektrisch veld zijn of, in het geval van denaturerende gradiëntgelelektroforese (DGGE), een denatureermiddel zoals een mengsel van ureum en formamide. Eiwitten migreren naar de anode als ze negatief zijn geladen en de kathode als ze positief zijn geladen. Omdat grotere moleculen langzamer migreren dan kleinere moleculen, kunnen wetenschappers de afgelegde afstand meten en logaritmen gebruiken om de grootte van de fragmenten te bepalen.
Denaturing Gradient Gel Electrophoresis

Met DGGE beweegt DNA met een stijgende gradiënt denaturerende kracht totdat de kracht voldoende is om dat specifieke DNA-fragment volledig te denatureren of ontvouwen. Op dit punt stopt de migratie. Wetenschappers kunnen deze methode gebruiken om fragmenten te scheiden op basis van hun individuele vatbaarheid voor denaturering.
Wat de buffer doet

In het geval van elektroforese die scheidt op basis van lading, geven ionen in de buffer de benodigde lading door voor scheiding. De buffer houdt, door een reservoir van zwak zuur en base te verschaffen, ook de pH binnen een smal bereik. Dit is belangrijk omdat de structuur en lading van een eiwit of nucleïnezuur zal veranderen als het wordt onderworpen aan significante pH-veranderingen, waardoor een goede scheiding wordt voorkomen.
Typische Buffers

Verschillende buffers zijn ideaal om de elektroforesegel op verschillende te houden gewenste pH-bereiken. Typische buffers die door wetenschappers voor dit doel worden gebruikt, zijn azijnzuur, boorzuur, fosforzuur en citroenzuur, evenals glycine en taurine. In het algemeen moet de pKa-waarde (zuurdissociatieconstante) dichtbij de vereiste pH liggen. Het heeft de voorkeur boven ons buffers die een lage ladingsgrootte bieden om niet te veel stroom te geleiden