Proteaseremmers zijn enzymen die de werking van proteases remmen, wat bepaalde enzymen zijn die eiwitten in de cellen doden. Er zijn verschillende proteasen die zich op verschillende eiwitten richten. Daarom wordt, om de functionaliteit van eiwitten na de cellysis te behouden, een combinatie of cocktail van proteaseremmers gebruikt. Deze zijn verkrijgbaar in oplossing, tablet of poedervorm.

Proteaseremmers

Maak aprotinine, leupeptine en pepstatine bij stockconcentraties van 100uM (MicroMolar).

Aprotinine is beschikbaar in oplossingsvorm bij een voorraadconcentratie van 100 mM. Om 1 ml (milliliter) van 100uM te maken, los 1ul (microliter) op in 999ul van de 1X PBS (fysiologische bufferoplossing).

Leupeptine is verkrijgbaar als een poeder. Het molecuulgewicht van Leupeptin is 475,6. Los 100 μg (microgram) poeder op in 2 ml water om een ​​voorraadconcentratie van 100 μM te bereiken.

Maak voor het maken van Pepstatine 100 μg poederpepta-tine in 1,45 ml water om een ​​voorraadconcentratie van 100uM te bereiken.

Al deze kunnen met elkaar gemengd of afzonderlijk opgeslagen worden bij min 80 graden Celsius.

Maak PMSF (fenylmethylsulfonyl fluoride) op voorraad 100 mM. PMSF komt in de poedervorm. Het molecuulgewicht van PMSF is 174,19. Los 10 mg PMSF op in 572 ul 100 procent ethanol en bewaar bij 4 graden Celsius. Het is lichtgevoelig en wordt in het donker bewaard.

Dit wordt vlak voor gebruik toegevoegd aan de lysisbuffer.

Meng de proteases samen in de vereiste concentraties. Over het algemeen worden ze verdund met een factor 100 voor gebruik.

Tip

Commercieel verkrijgbare cocktails van proteaseremmers besparen tijd en zijn gemakkelijk te gebruiken. Ze komen in de vorm van tablets of oplossingen.