Voeg in een reageerbuis 10 microliter bacteriekweek tot 90 microliter verdunningsmedium. Sluit het deksel van de buis goed en draai voorzichtig rond om een homogeen mengsel te verkrijgen. Nu is het monster een tiende van zijn oorspronkelijke concentratie.

Breng 10 microliter van dit nieuwe monster over in een nieuwe reageerbuis met 90 microliter verdunningsmedium, meng het opnieuw. Nogmaals, het resultaat is dat het monster verder wordt verdund - nu is het honderdste van zijn oorspronkelijke concentratie. Herhaal dit verschillende keren, totdat het originele monster 10 tot 10 ^{10 tot 10 is verdund. Zorg ervoor dat elke buis is geëtiketteerd met de juiste verdunning, bijvoorbeeld 10 -1, 10 -2 enzovoort.}

Breng 10 microliter van de laatste verdunning af op de agarplaat. Verdeel de bacteriële oplossing met behulp van de spreidrand over het gehele oppervlak van de agarplaat. Herhaal dit voor nog twee platen. Het is ook gebruikelijk om deze stappen ter vergelijking uit te voeren met andere verdunningsniveaus. Zorg ervoor dat u de onderkant van de platen labelt. Plaats de deksels op elke plaat terug en laat de agarplaten enkele minuten drogen, hetzij op een laboratoriumbank onder een vlam, of in een incubator. Plaats de platen in de incubator die moet worden ingesteld op de juiste temperatuur voor de bacteriestam. Laat 12 tot 16 uur groeien.

Kolonies moeten na 16 uur zichtbaar zijn; sommige genetische modificaties kunnen echter langer vereisen (bijvoorbeeld kleurontwikkeling). Wanneer kolonies waarneembaar zijn, haal de platen eruit en vind die met tussen de 30 en 300 kolonies. Plaats met behulp van een permanente marker een punt op de bodem van de petrischaal - de kant met de agar, niet het deksel - overal waar een kolonie zichtbaar is door de agar. Tel elke markeringspunt. Herhaal dit voor elk gerecht.

Om de hoeveelheid bacteriën in de startcultuur voor dit experiment te meten, moet de verdunning in de berekeningen op twee plaatsen worden omgekeerd. Ten eerste, toen je een microliter uit de reageerbuis nam om in de petrischaal te doen, nam je een tiende van het verdunde monster, dus je moet alles vermenigvuldigen met 10 om dat om te keren. Als de verdunningsfactor in de reageerbuis bijvoorbeeld 10 <7> 7 is, moet het aantal kolonies worden vermenigvuldigd met 10 <7 om het verdunningseffect om te keren. Verwijder eenvoudig het negatieve teken van de exponent in de berekeningen. Gebruik de formule:

[Aantal getelde kolonies] × 10 × [hoe vaak het monster moet worden vermenigvuldigd om de oorspronkelijke concentratie te bereiken: bijvoorbeeld 10 ^{5] \u003d aantal kolonievormende eenheden (CFU) per milliliter startcultuur. Dit is de bacteriegroei in uw petrischalen.}

Tips