Bacteriën worden gekweekt in petrischalen op een vast medium dat bekend staat als bacteriële agar, waar zich verhoogde, cirkelvormige kolonies vormen. In tegenstelling tot een individuele bacteriecel is een kolonie een groep bacteriën die groot genoeg is om met het blote oog zichtbaar te zijn. Bacteriegroei kan worden gemeten door eenvoudig te observeren hoeveel kolonies aanwezig zijn; meer kwantitatieve methoden omvatten echter het gebruik van een telkamer, of vaker, haalbare plaattellingen. Dit laatste wordt het vaakst gebruikt omdat het ook kwalitatieve informatie biedt, zoals het effect van verschillende groeicondities. Aangezien er miljarden bacteriën in een petrischaal kunnen zijn, moet eerst het monster worden verdund, zodat het aantal kolonies kan worden geteld.

Voeg in een reageerbuis 10 microliter van de bacteriecultuur toe aan 90 microliter verdunningsmedium. Sluit het deksel van de buis stevig af en draai zachtjes om een ​​homogene mix te krijgen. Nu is het monster een tiende van de oorspronkelijke concentratie.

Breng 10 microliter van dit nieuwe monster over in een nieuwe reageerbuis met 90 microliter verdunningsmedium, meng het opnieuw. Nogmaals, het resultaat zal het monster verder verdund zijn - nu zal het een honderdste van zijn oorspronkelijke concentratie zijn. Herhaal dit meerdere keren, totdat het oorspronkelijke monster tussen 10 en 4 keer 10 keer is verdund. Zorg ervoor dat elke buis is gelabeld met de juiste verdunning, bijvoorbeeld 10 ^{-1, 10 -2 enzovoort.}

Voeg 10 microliter van de laatste verdunning voltooid op de agarplaat. Verspreid met de spreidingsrand de bacteriële oplossing over het gehele oppervlak van de agarplaat. Herhaal dit voor nog twee platen. Het is ook gebruikelijk om deze stappen uit te voeren met andere niveaus van verdunning ter vergelijking. Zorg ervoor dat de bodems van de platen worden geëtiketteerd. Vervang de deksels op elke plaat en laat de agarplaten een aantal minuten op een laboratoriumbank onder een vlam of in een broedmachine drogen. Plaats de platen in de incubator die op de juiste temperatuur moet worden ingesteld voor de bacteriestam. Laat 12 tot 16 uur groeien.

Kolonies moeten na 16 uur zichtbaar zijn; Sommige genetische modificaties kunnen echter langer duren (bijvoorbeeld kleurontwikkeling). Wanneer kolonies waarneembaar zijn, neemt u de platen weg en vindt u die met 30 tot 300 kolonies. Gebruik een permanente marker om een ​​punt op de bodem van de petrischaal te plaatsen - de kant met de agar, niet het deksel - waar een kolonie zichtbaar is door de agar. Tel elke markeringspunt. Herhaal dit voor elk gerecht.

Om de hoeveelheid bacteriën in de begincultuur voor dit experiment te meten, moet de verdunning in de berekeningen op twee plaatsen worden omgekeerd. Ten eerste, toen u één microliter uit de reageerbuis nam om in de petrischaal te doen, nam u een tiende van het verdunde monster, dus u moet alles met 10 vermenigvuldigen om dat te keren. Bovendien, als de verdunningsfactor in de reageerbuis bijvoorbeeld 10 <-> 7 was, dan moet het aantal kolonies worden vermenigvuldigd met 10 <7> om het verdunningseffect om te keren. Verwijder gewoon het negatieve teken van de exponent in de berekeningen. Gebruik de formule:

[Aantal kolonies geteld] × 10 × [hoe vaak het monster vermenigvuldigd moet worden om de oorspronkelijke concentratie te bereiken: bijvoorbeeld 10 ^{5] = aantal kolonievormende eenheden (CFU) per milliliter van de uitgangscultuur. Dit is de bacteriële groei in uw petrischalen.}

TL; DR (te lang; niet gelezen)

Steriliseer de glazen strooier door de strooikant in 70 procent ethanol te dopen en het inbrengen in een bunsenbrandervlam. Laat de ethanol in brand vliegen en verbrand langzaam de alcohol, die alle bacteriële besmetting zal doden. Tik het zachtjes aan op de droge (dat wil zeggen, geen bacteriën) deel van de agar om het te laten afkoelen - de agar mag niet smelten bij contact.

Waarschuwing

Behandel elke bacterie alsof het mogelijk is pathogeen en gebruik de juiste procedures voor laboratoriumveiligheid.