science >> Wetenschap >  >> Biologie

Hoe celconcentratie te berekenen

Wetenschappers en technici moeten vaak de concentratie cellen in een suspensie berekenen. Wanneer een patiënt bijvoorbeeld zijn bloed laat afnemen op het kantoor van een arts, kan het laboratorium bepaalde methoden gebruiken om te zoeken naar de hoeveelheid witte bloedcellen in een bepaald bloedvolume. Dit geeft de arts veel informatie over de gezondheid van haar patiënt, met name zijn immuunsysteem en of hij tegen een infectie of een andere ziekte vecht. Tests als deze kunnen zoeken naar veel andere cellen in bloed, evenals ruggenmergvocht en andere lichaamsvloeistoffen, zoals het aantal zaadcellen in sperma voor vruchtbaarheid. Wetenschappers berekenen ook celconcentraties van bacteriën, gisten en andere micro-organismen voor verschillende doeleinden, variërend van ecologisch onderzoek tot industriële technologieën. Een van de meest gebruikelijke technieken wordt ook onderwezen in vele colleges biologie, en het gebruikt een apparaat dat een telkamer wordt genoemd.

  1. Het monster verdunnen

    Voor de celsuspensie kan de telkamer in, het kan verdunning nodig hebben omdat het duizenden of miljoenen cellen kan bevatten. In dat geval kunnen de cellen redelijkerwijs niet worden geteld. Gebruik een steriele pipet om het monster te verdunnen om tien microliter van de celoplossing in een reageerbuis met 90 microliter verdunningsmiddel te plaatsen. Het type verdunner hangt af van het type cel. Meng het goed. Deze oplossing is nu tien keer meer verdund dan het oorspronkelijke monster, dus de verdunningsfactor is 10 <-1. Label het. Herhaal dit verschillende keren, elke keer met een steriele pipet, totdat de oplossing voldoende verdund is. Als u het een tweede keer verdunde, was de tweede reageerbuis 100 keer meer verdund dan de oorspronkelijke oplossing, dus de verdunningsfactor was 10 -2 enzovoort.

  2. De cellen tellen

    Mogelijk moet u verschillende verdunningen proberen om de juiste verdunningsfactor voor de telkamer te bepalen. Een telkamer is in feite een zeer kleine, heldere, rechthoekige doos met een precieze diepte en een precies rooster bovenaan. Het is ook bekend als een hemocytometer, of soms een hemacytometer. Het doel is dat de suspensie voldoende verdund is zodat wanneer deze in de telkamer wordt bekeken, geen cellen elkaar overlappen en ze op een uniforme manier over het rooster worden verdeeld. Pipetteer de verdunde suspensie die de cellen bevat in de put in de telkamer, waar deze zich via capillaire werking in de roosterkamer zal vestigen. Plaats de telkamer op het microscooppodium en bekijk deze op laag vermogen.

    Het rooster bevat vierkanten die zijn gemaakt van nog kleinere vierkanten. Selecteer ongeveer vier of vijf vierkanten, of hoeveel u ook nodig hebt om ten minste 100 cellen te tellen, in een patroon van uw keuze, zoals de vier hoeken en een middenvierkant. Als de cellen groot zijn, kunnen dit de grote vierkanten zijn, maar als de cellen klein zijn, kunt u in plaats daarvan de kleinere vierkanten kiezen.

  3. Concentratie berekenen

    Het specifieke volume van elk rastervierkant kan variëren door telkamerfabrikant, maar vaak is de diepte van de kamer 0,1 millimeter, het oppervlak van de grote vierkanten is 1 vierkante millimeter en het gebied van de kleinere vierkanten is 0,04 vierkante millimeter. De grotere vierkanten hebben dan een volume van 0,1 kubieke millimeter. Neem in dit voorbeeld aan dat u in totaal 103 cellen in vijf vierkanten hebt geteld en dat u het oorspronkelijke monster hebt verdund tot de verdunningsfactor 10 -2 was.

    Als elk rastervierkant een volume van 0,1 heeft kubieke millimeter en vijf werden geteld, vervolgens was het totale volume van de getelde kamer 0,5 kubieke millimeter, en er waren 103 cellen. Verdubbeld om er 1 kubieke millimeter van te maken, zou het 206 cellen zijn. Een kubieke centimeter komt overeen met 1 milliliter, wat een nuttige meting is voor vloeistoffen. Er zijn 1.000 kubieke millimeter in een kubieke centimeter. Als er dus een kubieke centimeter of een milliliter suspensie was geweest, zou je 206.000 (206 x 1.000) cellen hebben geteld. Dit is hoe het eruit ziet als een vergelijking:

    Volume van raster vierkant × aantal getelde vierkanten \u003d totaal volume van getelde suspensie

    Aantal cellen ÷ volume van getelde suspensie \u003d aantal cellen per millimeter in blokjes

    Aantal cellen per millimeter in blokjes × 1000 \u003d aantal cellen per milliliter

  4. Onverdunde concentratie berekenen

    U moet rekening houden met elke verdunning die is uitgevoerd om de initiële oplossing telbaar onder de microscoop. In dit voorbeeld is de verdunningsfactor 10 <-2). Om de beginconcentratie van de oplossing te berekenen:

    Celtelling per milliliter ÷ verdunningsfactor \u003d Celconcentratie

    Voor dit voorbeeld is de celtelling per milliliter 206.000, en dat te delen door 10 -2 (0,01) geeft een celconcentratie van 20.600.000 cellen per milliliter in het oorspronkelijke monster.