In een artikel gepubliceerd in Klein , onderzoekers hebben met succes een nieuwe kwalitatieve en kwantitatieve methode toegepast voor de detectie van een DNA-sequentie die kenmerkend is voor Leishmania infantum kinetoplast, een veel voorkomende parasiet in de veterinaire sector die ook mensen treft.

De klassieke PCR-techniek overwinnen

De Polymerase Chain Reaction (PCR) is tegenwoordig de standaardmethode om de aanwezigheid van een specifieke DNA-sequentie in een monster te identificeren. De PCR maakt gebruik van enzymen en twee primers, strengen van korte nucleïnezuursequenties die dienen als startpunt voor DNA-kopie. Als de detectie positief is, deze techniek produceert miljoenen kopieën van de probleemreeks om de detectie ervan te vergemakkelijken. Deze DNA-amplificatie omvat nauwkeurige thermische veranderingen (thermocycling) en geavanceerde en dure apparatuur, die worden overwonnen door een alternatieve benadering genaamd isotherme versterking, uitgevoerd bij constante temperatuur.

De auteurs van het artikel presenteren een nieuw ontwerp van isothermische amplificatie met behulp van primers die zijn gelabeld met zowel gouden nanodeeltjes als magnetische microkralen. Het geamplificeerde product draagt ​​beide labels waardoor een snelle zuivering en kwantificering mogelijk is. De magnetische eigenschappen van de eerste primer vergemakkelijken de zuivering/preconcentratie van het geamplificeerde DNA door middel van magnetische scheidingsmethoden. Anderzijds, de gouden nanodeeltjes kunnen gemakkelijk worden gekwantificeerd door eenvoudige elektrokatalytische detectiemethoden. Dus, het gebruik van primers gelabeld met gouden nanodeeltjes en magnetische microbeads maakt van isotherme amplificatie een snellere en gemakkelijkere kwalitatieve en kwantitatieve diagnostische methode.

Nanodeeltjes voor Leishmania-detectie en andere point-of-care-tests

Deze benadering werd met succes toegepast voor de detectie van een DNA-sequentie die kenmerkend is voor Leishmania infantum kinetoplast, een parasiet die verantwoordelijk is voor een ziekte bij gedomesticeerde honden, wilde hondachtigen en mensen. De elektrochemische methode vertoonde een goede reproduceerbaarheid en gevoeligheid. Verder, geamplificeerd DNA van honden zonder Leishmania werd perfect gediscrimineerd, het aantonen van de specificiteit van zowel de amplificatieprocedure als de elektrochemische detectie. In feite, de prestatie van de voorgestelde aanpak is beter dan die verkregen met andere point-of-care-tests voor Leishmania-detectie, biedt ook een kwantitatief hulpmiddel voor de bepaling van parasieten. Deze methode vertegenwoordigt een universele methodologie die kan worden toegepast voor elk isotherm DNA-amplificatieontwerp.