science >> Wetenschap >  >> Elektronica

Geautomatiseerde voorbereiding van MS-gevoelige fluorescent gelabelde N-Glycans met een pipetteerrobot

Contourkaart met het opgetelde totale gelabelde N-glycaanherstel van cetuximab over een reeks temperaturen voor eiwitdenaturatie (60 ° C tot 90 ° C) langs de X-as en de-N-glycosylering (40 ° C tot 60 ° C) langs de Y-as. Krediet:Corey Reed

Een nieuw origineel onderzoeksrapport beschikbaar voor druk op: SLAS-technologie demonstreert de semi-automatisering van een GlycoWorks RapiFluor-MS (RFMS) Kit met behulp van een pipetteerrobot om de productiviteit van biowetenschappelijk onderzoek te verbeteren. Dit robotplatform maakt gebruik van standaard handmatige pipetten en een optisch geleide arm om de automatisering van handmatige procedures te vergemakkelijken, het verminderen van de tijd die onderzoekers aan de laboratoriumtafel doorbrengen, en nabootsen, zo dicht mogelijk, de resultaten die zijn verkregen bij gebruik van het handmatige GlycoWorks RFMS-protocol.

De GlycoWorks RapiFluor-MS (RFMS) Kit werd gelanceerd in 2015 en vereenvoudigt de manier waarop onderzoekers N-gebonden glycanen kunnen vrijgeven en labelen. De kit stelt analisten in staat om een ​​hoogproductieve monstervoorbereiding uit te voeren en zorgt voor nauwkeurige en herhaalbare N-glycanen-profielen. De RFMS-tag is uniek omdat hij snelle tagging en superieure gevoeligheid biedt voor zowel optische als massaspectrometrische analyses.

Auteurs Corey Reed, Jennifer Fournier en Stephan Koza van Waters Corporation (Milford MA) en Nikolas Vamvoukas van Andrew Alliance vereenvoudigen dit monstervoorbereidingsprotocol verder door automatisering met behulp van een in de handel verkrijgbare robotica-oplossing van Andrew Alliance. Andreas, de pipetteerrobot, presenteert een ideaal platform voor automatisering van deze kit met zijn vermogen om lage volumes te pipetteren en aan te passen aan volumevariabiliteit met aangepaste dominostenen die speciaal voor deze oplossing zijn gebouwd.

Om de resultaten van het handmatige protocol nauwkeurig te reproduceren, temperatuurgevoelige stappen worden opnieuw geoptimaliseerd voor het geautomatiseerde platform en een reeks temperaturen wordt getest om maximale N-glycaan-afgifte-efficiëntie te bereiken. Na kleine aanpassingen, het geautomatiseerde protocol blijkt statistisch vergelijkbaar te zijn met het handmatige protocol in termen van het herstel van RFMS-gelabelde N-glycanen en de resulterende relatieve piekgebieden van de fluorescentie. In aanvulling, een subroutine in de procedure vereenvoudigt het normalisatieproces van de monsterconcentratie voorafgaand aan het RFMS-protocol, gebruikers aanzienlijke hoeveelheden tijd besparen.

Uiteindelijk, de auteurs hanteren een robuust en gebruiksvriendelijk protocol en breiden met succes de voordelen van biowetenschappelijk onderzoek uit door de laboratoriumproductiviteit te verhogen. Gebruikers kunnen nu naadloos overstappen van het handmatige protocol naar de geautomatiseerde oplossing, het ontlasten van gebruikers van monotoon pipetteren en het controleren van belangrijke delen van het protocol die normaal vatbaar zijn voor gebruikersfouten.