Vloeibare voedingsvloeistof wordt gebruikt voor het kweken van bacteriën zoals Escherichia coli. Recepten voor deze bouillon variëren afhankelijk van de bacteriesoort en de aanwezigheid van genetische modificaties, bijvoorbeeld antibioticumresistentie. De bouillon kan worden gestold door toevoeging van agar, wat de bacteriën in staat stelt om verschillende kolonies te vormen, terwijl ze in vloeibare kweken eenvoudigweg door het volume verspreiden. Dit is een basale maar essentiële techniek voor geavanceerde methoden zoals genklonen of microbiologische testen. In dit artikel wordt verondersteld dat standaard-laboratorium-Escherichia coli-stammen moeten worden gekweekt op Luria-bouillon (LB) -agarplaten (of petrischalen).

Weeg 10 gram trypton van bacteriekwaliteit, 5 gram gistextract, 5 af gram natriumchloride, 15 gram agar of agarose en 1 milliliter 1N natriumhydroxide. Meng deze met een hoeveelheid gedestilleerd en in een autoclaaf behandeld steriel water totdat 1 liter medium is verkregen. Autoclaaf de media in losjes afgesloten flessen of kolven gedurende 25 minuten. Laat afkoelen tot ongeveer 50 graden Celsius voordat reagentia worden toegevoegd die bij hoge temperaturen worden vernietigd, zoals antibiotica of andere voedingssupplementen.

Laat het geautoclaveerde medium afkoelen tot 50 graden Celsius en niet lager dan 45 graden Celsius , omdat de agar in de container wordt geplaatst voordat deze kan worden gegoten. Zorg voor steriele petrischalen en giet voldoende om het volledige oppervlak van de plaat en ten minste de helft van de diepte te bedekken. Vermijd overvulling van de platen en laat de agar bij voorkeur niet in contact komen met de bovenrand van de schaal. Laat de platen stollen in een steriele omgeving (bijvoorbeeld onder een kap met laminaire stroming) door de deksels weg te laten en naar een hoek van de kap.

Maak de platen droog. Hoewel de platen kunnen worden gebruikt zodra ze zijn ingesteld, zal er wat vocht aanwezig zijn op het oppervlak van de agar, wat zal voorkomen dat bacteriekolonies zich voldoende hechten. Daarom is het het beste om de platen te drogen alvorens bacteriën aan te brengen, bijvoorbeeld door ze een paar dagen of een half uur bij kamertemperatuur te laten rusten onder een laminaire stroming of in een incubator van 37 graden Celsius.

Bewaar de platen. Gedroogde platen moeten ondersteboven (omgekeerd) op hun deksels worden gestapeld en terug in de oorspronkelijke verpakking worden gebracht, dichtgebonden en in folie gewikkeld om te beschermen tegen licht of in een geschikte container. Schrijf altijd de bereidingsdatum op de platen en vermijd het gebruik als de platen ouder zijn dan 2 maanden.

Tip

Voer zoveel mogelijk van de bovenstaande stappen uit (bij voorkeur alle) binnen een steriele omgeving (bijv. onder een open vlam of een laminaire stroming) om te voorkomen dat bacteriële verontreinigingen in de lucht in de media terechtkomen en groeien.