Tatomm/iStock/GettyImages

Het bepalen van de celconcentratie in een vloeibaar monster is een routinematige maar essentiële taak in klinische en onderzoekslaboratoria. Nauwkeurige celtellingen informeren artsen over de immuunstatus van een patiënt, helpen bij het diagnosticeren van infecties en begeleiden de vruchtbaarheidsbeoordelingen. In onderzoek stellen ze wetenschappers in staat bacteriën, gisten en andere micro-organismen te kwantificeren voor ecologische studies of industriële processen. De meest gebruikelijke, betrouwbare methode voor het tellen van cellen is de hemocytometer, een nauwkeurige telkamer die veel wordt onderwezen in biologiecursussen en wordt gebruikt in professionele laboratoria over de hele wereld.

1. Verdun het monster

Wanneer een celsuspensie miljoenen cellen bevat, wordt direct tellen onpraktisch omdat cellen elkaar overlappen en niet van elkaar te onderscheiden zijn. Om een ​​geschikte verdunning te verkrijgen, brengt u 10 µl van de oorspronkelijke oplossing over in een steriele reageerbuis die 90 µl van een geschikt verdunningsmiddel bevat (bijvoorbeeld een fosfaatgebufferde zoutoplossing of kweekmedium). Meng grondig; hierdoor ontstaat een tienvoudige verdunning (verdunningsfactor=10⁻¹). Label het buisje en herhaal de procedure totdat het monster voldoende verdund is voor een nauwkeurige telling. Elke extra tienvoudige verdunning vermenigvuldigt de verdunningsfactor met 10 (een tweede verdunning geeft bijvoorbeeld 10⁻², een derde 10⁻³).

2. Tel de cellen

De hemocytometer is een kleine, heldere kamer met een rooster op het bodemoppervlak geëtst. De diepte is doorgaans 0,1 mm en het raster is verdeeld in grote en kleine vierkanten met een oppervlakte van respectievelijk 1 mm² en 0,04 mm². Pipetteer een klein volume van de verdunde suspensie in het putje van de kamer. Capillaire werking verspreidt de vloeistof over het rooster. Plaats de kamer op een microscooptafel en bekijk deze met een lage vergroting (×10–×40).

Kies een handig patroon van vierkanten (meestal de vier hoeken en een vierkant in het midden) om minimaal 100 cellen te tellen. Gebruik voor grote cellen de grotere vierkanten; voor kleinere cellen telt u de kleinere vierkanten. Noteer het aantal cellen in elk geselecteerd vierkant.

3. Bereken de concentratie van het verdunde monster

Elk groot vierkant heeft een volume van 0,1 mm³ (0,1 mm×1 mm²). Als je 103 cellen verdeeld over vijf grote vierkanten hebt geteld, is het totale getelde volume 0,5 mm³. Als u dit volume verdubbelt om een ​​volledige 1 mm³ weer te geven, krijgt u 206 cellen. Omdat 1 ml gelijk is aan 1 cm³ en 1.000 mm³ bevat, is de concentratie in het verdunde monster:

• Cellen per mm³ =206 cellen ÷ 1 mm³ =206 cellen/mm³
• Cellen per ml =206 cellen/mm³×1000 =206.000 cellen/ml

Formule:Volume van getelde oppervlakte×aantal vierkanten =totaal getelde volume
Cellen ÷ totaal geteld volume =cellen per mm³
cellen per mm³×1000 =cellen per ml

4. Bepaal de onverdunde monsterconcentratie

Pas de verdunningsfactor aan die tijdens de bereiding is gebruikt. Voor een verdunningsfactor van 10⁻² (d.w.z. 1:100) is de oorspronkelijke monsterconcentratie:

• Cellen per ml (verdund) ÷ verdunningsfactor =206.000 ÷ 0,01 =20.600.000 cellen/ml

De aanvankelijke onverdunde suspensie bevatte dus ongeveer 20,6 miljoen cellen per milliliter.