Science >> Wetenschap >  >> Biologie

Wat zijn de functies van natriumperchloraat bij de isolatie van genomisch DNA uit menselijk bloed?

Natriumperchloraat (NaClO4) speelt een cruciale rol in het proces van genomische DNA-isolatie uit menselijk bloed. Dit zijn de belangrijkste functies:

1. Remming van DNAsen :Bloed bevat verschillende enzymen, waaronder nucleasen, die DNA kunnen afbreken als ze niet voldoende worden geremd. Natriumperchloraat werkt als een remmer van DNases, vooral diegene die magnesium of calcium nodig hebben voor hun activiteit. Het bindt zich aan deze metaalionen, waardoor wordt voorkomen dat ze deelnemen aan door enzym gekatalyseerde reacties en het DNA wordt beschermd tegen afbraak.

2. Eiwitneerslag :Natriumperchloraat wordt vaak gebruikt tijdens de eiwitprecipitatiestap van DNA-isolatie. Het wordt toegevoegd aan een cellysaat of suspensie om de precipitatie van eiwitten te induceren, waaronder hemoglobine, dat overvloedig aanwezig is in rode bloedcellen. De hoge zoutconcentratie die door natriumperchloraat wordt gecreëerd, verstoort de oplosbaarheid van eiwitten, waardoor ze bij centrifugeren aggregeren en een pellet vormen. Hierdoor kan het supernatant dat het DNA bevat, worden gescheiden van de neergeslagen eiwitten.

3. Neerslag van nucleïnezuren :Natriumperchloraat kan ook worden gebruikt om nucleïnezuren, inclusief genomisch DNA, te precipiteren uit het supernatant dat wordt verkregen na eiwitprecipitatie. Het bereikt dit door de oplosbaarheid van DNA-moleculen te verminderen. Wanneer ethanol of isopropanol samen met natriumperchloraat aan het supernatant wordt toegevoegd, wordt het DNA onoplosbaar en vormt het een zichtbaar neerslag. Dit neerslag kan worden verzameld door centrifugatie en verder gezuiverd om zuiver genomisch DNA te verkrijgen.

4. Verwijdering van verontreinigingen :Natriumperchloraat helpt bij het verwijderen van verontreinigingen zoals eiwitten, andere macromoleculen en zouten uit het DNA-preparaat. De hoge zoutconcentratie die met natriumperchloraat wordt bereikt, helpt bij het efficiënt neerslaan van onzuiverheden, waardoor gezuiverd DNA achterblijft.

5. Optimalisatie van DNA-opbrengst en -kwaliteit :Het gebruik van natriumperchloraat bij de isolatie van genomisch DNA kan zowel de opbrengst als de kwaliteit van het geëxtraheerde DNA optimaliseren. Door DNAsen effectief te remmen, voorkomt het DNA-afbraak, waardoor de integriteit en het hoge molecuulgewicht van het geïsoleerde DNA worden gegarandeerd. Bovendien verbetert de efficiënte verwijdering van verontreinigingen de algehele zuiverheid van het DNA-preparaat, waardoor het geschikt wordt voor verschillende stroomafwaartse toepassingen in de moleculaire biologie.

Over het geheel genomen speelt natriumperchloraat een cruciale rol bij de isolatie van genomisch DNA uit menselijk bloed door DNases te remmen, de precipitatie van eiwitten en nucleïnezuren te vergemakkelijken, verontreinigingen te verwijderen en de kwaliteit en opbrengst van het geïsoleerde DNA te verbeteren.