Wetenschappers gebruiken flowcytometrie om onderscheid te maken tussen verschillende soorten cellen of microscopische organismen. Het is een hulpmiddel dat in veel toepassingen wordt gebruikt, zoals medische diagnostiek of forensische pathologie. Hoewel deze experimentele techniek redelijk gemakkelijk te bereiken is, is de analyse van de complexe gegevens die door de flowcytometer worden geproduceerd, moeilijker vanwege de meerdere experimentele factoren en /of cytometerparameters. Als zodanig is het routinematig dat cytometrische gegevens worden gevisualiseerd en geanalyseerd met behulp van geavanceerde professionele programma's zoals CELLQuest of FlowJo. Bekendheid met flowcytometrietechnieken, machines en software is noodzakelijk om de resultaten van deze experimenten te begrijpen.

Flow-cytometriegegevens begrijpen

Verduidelijk het doel van het experiment door te vragen: "Wat was de vraag of hypothese die wordt onderzocht? " Dit is vereist om de onbewerkte resultaten aan te passen aan de juiste indeling en instellingen voor verdere analyse met behulp van statistische cytometriesoftware. Breng de nodige wijzigingen aan om de gegevens weer te geven met de relevante instellingen (bijvoorbeeld positieve cellen, negatieve poorten, fluorescentie-intensiteit, celpopulaties, enzovoort).

Vind poorten. Cellen kunnen worden gegroepeerd of eenvoudigweg samen worden geclusterd op een dichtheidsplot of contourdiagram. De groepen scheiden vaak afhankelijk van hun identiteit. Als één groep erg intensief kleurt voor een bepaalde marker of antilichaam, wordt geconcludeerd dat de leden van die groep allemaal de identiteit van het specifieke celtype hebben, wat die marker tot expressie brengt. Het is gebruikelijk om cellen te vinden die positief zijn voor meer dan één van deze markers, en deze cellen zijn meestal een tussenproduct en worden aangeduid als 'dubbel positief'.

Kijk naar scattergraphs. De manier waarop de groepen cellen zich verspreiden in een spreidingsdiagram is een indicatie van de grootte van de cellen. Cellen met zeer grote of hoge scatters zijn typisch grote cellen; ze kunnen echter groot zijn, simpelweg omdat ze een hoog percentage cytoplasma bevatten, of ze kunnen hoog zijn omdat ze een zeer grote kern hebben. Afhankelijk van de biologie die wordt onderzocht, zal dit natuurlijk sterk variëren tussen experimenten.

Kijk naar cijfers. Pas de grafieken aan om verschillende parameters op één as weer te geven (gewoonlijk de X-as) met behoud van de tellingen op de Y-as. Dit geeft de proportie van de steekproefpopulatie aan die positief is voor die specifieke parameter, omdat een piek normaliter zal worden waargenomen in een positief gekleurd monster, dat afwezig zal zijn in het negatieve controlemonster.

Kijk naar meerdere- parameterhistogrammen. Door de X-as en de Y-as aan te passen om elk een andere parameter te vertegenwoordigen die tijdens het experiment werd onderzocht, is het mogelijk om een ​​beter begrip van de eigenschappen van het monster te krijgen. Door bijvoorbeeld de X-as in te stellen op rode fluorescentie en de Y-as op groene fluorescentie, kunnen kwadrant-achtige poorten worden berekend voor het monster om vier gebieden van een kwadrant weer te geven waarin cellen aanwezig zijn en gekleurd voor rood of groen. fluorescentie, beide kleuren of helemaal geen. Hierdoor kan een heterogeen monster worden verdeeld in de samenstellende delen en eventuele overlappende entiteiten die moeten worden gevisualiseerd en gekwantificeerd.