TA-klonering is een eenvoudige en handige methode voor het subkloneren van polymerasekettingreactie (PCR) -producten. "TA" is een afkorting voor "thymine" en "adenine." Deze kloneringstechniek maakt gebruik van het vermogen van thymine om te hybridiseren met adenine in de aanwezigheid van ligasen. Restrictie-enzymen worden niet gebruikt, in tegenstelling tot de traditionele subkloneringsmethode. In plaats daarvan worden PCR-producten geamplificeerd met behulp van Taq-polymerase-enzymen.

Methode

De TA-kloneringsmethode gebruikt de terminale transferase-activiteit van bepaald deoxyribonucleïnezuur dat overhangt op elk uiteinde van het PCR-product.

Een gelineariseerde kloningsvector met enkele, drie prime-T (3'-T) overhangen die een T-vector wordt genoemd, wordt gebruikt om dit PCR-product in een plasmidevector te kloneren. Het PCR-product wordt in hoge verhouding met deze vector gemengd.

DNA-ligase (T4-ligase) wordt aan het mengsel toegevoegd, waardoor de twee producten kunnen hybridiseren en zich bij elkaar kunnen voegen.

Voordelen en nadelen

TA-klonen is een handige methode voor het subkloneren van PCR-producten in de gelineariseerde vector en het is veel eenvoudiger en sneller dan traditionele methoden voor subklonen. Omdat deze methode geen restrictie-enzymen gebruikt, kunnen producten zonder restrictie-enzymplaatsen worden gekloond.

Een nadeel is dat TA-kloningsets erg duur zijn en daarom is hun gebruik beperkt. Bovendien is er geen directioneel klonen; dus de kans op klonen in een tegenovergestelde richting is groter.

TA Klonenpakketten op

Verschillende fabrikanten verkopen TA-klonenpakketten. Sommige zijn Invitrogen, QIAGEN en Premier Biosoft.