Gelelektroforese is een manier om DNA-fragmenten te scheiden op basis van hun grootte. U voegt volgkleurstof toe aan elk DNA-monster om u te helpen het monster te bekijken en de voortgang van de DNA-fragmenten door de gel te volgen.

Betekenis

Om fragmenten van DNA te scheiden voor het doel van door hun grootte te meten of een bepaald fragment te isoleren, plaatsen wetenschappers DNA in een agarosegel die is ondergedompeld in een oplossing die is geladen met een elektrische stroom. De stroom duwt de DNA-fragmenten door de gel en omdat de gel poreus is, worm kleinere DNA-fragmenten sneller door. Ze reizen verder dan grotere fragmenten in dezelfde hoeveelheid tijd.

Doelstelling

DNA is kleurloos als het in een reageerbuis in oplossing is. Om het monster beter zichtbaar te maken, zowel in de reageerbuis als in de gel, voegt u een gekleurde volgkleurstof toe aan het monster. De kleurstof heeft helemaal geen effect op het DNA.

Tracking

De gebruikelijke trackingkleurstof is broomfenolblauw in een 50% glyceroloplossing. Broomfenolblauw kleurt het monster helderblauw zodat het gemakkelijk is om de voortgang ervan door de gel te volgen. Wanneer de volgkleurstof ongeveer 3/4 van de lengte van de gel heeft afgelegd, is het tijd om de elektrische stroom uit te schakelen.

Dichtheid

De volgkleurstof is dicht vanwege de hoge concentratie van glycerol. Dat zorgt ervoor dat de DNA-monsters in de laadsleuven van de gel zinken, in plaats van weg te zweven in de oplossing boven de gel die de elektrische stroom transporteert.

Kleurstofmigratie

Bromophenol blauw migreert door een agarose oplossing met ongeveer dezelfde snelheid als een DNA-streng die 300 baseparen bevat. Als u de voortgang van grotere DNA-strengen wilt volgen, kunt u een volgkleurstof gebruiken met xyleencyaan, die met ongeveer dezelfde snelheid migreert als een DNA-streng met 4.000 basenparen.