Elektroforese is een techniek die wordt gebruikt bij het klonen, maar niet direct in het kloneringsproces zelf . Het is een krachtig hulpmiddel dat wordt gebruikt voor het analyseren van de DNA -fragmenten die betrokken zijn bij het klonen. Hier is hoe het werkt:

1. DNA -fragmentanalyse:

* Beperking Enzym Digestie: Tijdens het klonen gebruikt u restrictie -enzymen om uw DNA van interesse en de vector (plasmide) bij specifieke sequenties te verminderen. Dit genereert DNA -fragmenten van verschillende maten.

* gelelektroforese: De DNA -fragmenten worden vervolgens gescheiden op basis van hun grootte met behulp van gelelektroforese. Een gelmatrix (meestal agarose) wordt gebruikt en een elektrische stroom wordt toegepast. Kleinere fragmenten reizen sneller en verder door de gel dan grotere fragmenten.

* Visualisatie: De DNA -fragmenten worden gevisualiseerd met behulp van een kleurstof die bindt aan DNA en fluoresces onder UV -licht. Hiermee kunt u de verschillende banden van DNA op de gel zien, die de verschillende maten DNA -fragmenten vertegenwoordigen.

2. Gebruik in klonen:

* Verificatie van restrictie Digest: Elektroforese helpt ervoor te zorgen dat de restrictie -enzymen uw DNA met succes op de juiste locaties hebben gesneden en dat de vector de juiste restrictieites voor ligatie heeft.

* Analyse van klonen: Na ligatie (samenvoegen van het DNA -insert met de vector) wordt elektroforese gebruikt om te controleren of de ligatie succesvol is geweest. U kunt de grootte van het recombinante DNA -molecuul vergelijken met het oorspronkelijke DNA -fragment en vector.

* Screening -bibliotheken: Elektroforese kan worden gebruikt om de DNA -inserts in een bibliotheek van klonen te analyseren, waardoor klonen met het gewenste inzetstuk worden geïdentificeerd.

Samenvattend: Elektroforese maakt geen deel uit van het kernkloneringsproces zelf, maar het is een essentieel analytisch hulpmiddel om de verschillende stappen te verifiëren en ervoor te zorgen dat het kloneringsexperiment succesvol is.