1. Isolatie van het belang van interesse:

* Bron: Het gewenste gen wordt verkregen uit zijn oorspronkelijke organisme (bijv. Bacteriën, plant, dier).

* Methoden: Dit kan inhouden:

* Beperking Enzym Digestie: Specifieke enzymen snijden DNA bij precieze sequenties.

* PCR (polymerasekettingreactie): Versterkt een specifiek DNA -fragment.

2. Voorbereiding van de vector:

* Keuze van vector: Een geschikte vector (bijv. Plasmide, virus) is geselecteerd. De vector moet kunnen repliceren in de hostcel.

* Beperking Enzym Digestie: De vector wordt gesneden met hetzelfde restrictie -enzym dat wordt gebruikt voor het interessante gen, waardoor compatibele uiteinden worden gecreëerd.

* ligatie: Het belang van interessante en de geopende vector worden gecombineerd met behulp van DNA -ligase, die het DNA weer tegen elkaar verzegelt.

3. Transformatie:

* Inleiding in hostcel: Het recombinante DNA wordt geïntroduceerd in een gastheercel (bijv. Bacteriën, gist).

* Methoden: Gemeenschappelijke methoden zijn onder meer:

* Chemische transformatie: Cellen worden behandeld met chemicaliën die de permeabiliteit tot DNA vergroten.

* elektroporatie: Een korte elektrische puls creëert tijdelijke poriën in het celmembraan.

4. Selectie van getransformeerde cellen:

* markergenen: De vector draagt ​​vaak markergenen (bijv. Antibioticaresistentie) die de identificatie van cellen die het recombinant -DNA bevatten mogelijk maken.

* Groei op selectieve media: Cellen worden gekweekt op media die het antibioticum bevatten. Alleen cellen met het markergen zullen overleven en vermenigvuldigen.

5. Productie van het genproduct:

* Expressie: De getransformeerde cellen worden in grote hoeveelheden gekweekt en het belang van belang wordt tot expressie gebracht.

* Eiwitproductie: Het DNA van het gen wordt getranscribeerd in mRNA, dat vervolgens wordt vertaald in het gewenste eiwit.

* zuivering (optioneel): Als het eiwit het gewenste product is, kan het worden gezuiverd om andere cellulaire componenten te verwijderen.

Belangrijke punten om te onthouden:

* Beperkingsenzymen: Deze werken als moleculaire schaar, snijden DNA bij specifieke sequenties, waardoor "plakkerige uiteinden" achterblijven die kunnen baseren met compatibele uiteinden op andere DNA-fragmenten.

* vectoren: Dit zijn voertuigen die het gen van belang in de gastheercel dragen. Plasmiden zijn cirkelvormige stukken DNA die onafhankelijk in bacteriën repliceren. Virale vectoren kunnen het gen integreren in het genoom van de gastheer.

* markergenen: Deze genen zorgen voor de selectie van getransformeerde cellen.

* Transformatie -efficiëntie: Het proces van het introduceren van vreemd DNA in cellen is niet 100% efficiënt. Niet alle cellen zullen met succes het recombinante DNA opnemen.

Laat het me weten als je meer details wilt over een specifiek aspect van dit proces!