Wetenschappers gebruiken seriële verdunningen (een reeks van 1:10 verdunningen) om de bevolkingsdichtheid van bacteriële culturen te berekenen. Wanneer een druppel cultuur met een klein aantal bacteriën wordt uitgeplaat en geïncubeerd, zal elke cel theoretisch ver genoeg verwijderd zijn van andere cellen zodat het zijn eigen kolonie vormt. (In werkelijkheid kunnen sommige kolonies afstammelingen zijn van twee nabijgelegen cellen, maar dit is zeldzaam in verdunde culturen, en dus is het aantal kolonies een zeer goede schatting van het aantal cellen dat oorspronkelijk op de plaat is overgebracht.) Omdat de bevolkingsdichtheid onbekend, een verscheidenheid aan verdunningen moet worden gebruikt om een ​​plaat met een passend aantal kolonies te krijgen.

Seriële verdunningen

Label de zes reageerbuizen (elk met 9 ml groei media) als 1 tot 6. Label de zes agarplaten als 1 tot en met 6. Gebruik een pipetter en steriele 1 ml (ml) pipetpunten om 1 ml bacteriekweek over te brengen naar buis 1.

Meng goed en breng over 1 ml van tube 1 in tube 2 met behulp van een pipetter en steriele tips van 1 ml.

Herhaal stap 2 voor de resterende tubes, telkens wanneer u 1 mL overbrengt van de laatst gebruikte tube naar de volgende tube.

Gebruik een pipetter en steriele 0,1 mL tips om 0,1 mL van buis 1 over te brengen naar een agarplaat. Vlam een ​​L-vormige glazen staaf en gebruik deze om de druppel gelijkmatig over de plaat te verdelen. Incubeer de plaat gedurende 48 uur op een geschikte temperatuur voor de bacteriën die worden gebruikt. Verschillende soorten bacteriën hebben verschillende optimale groeitemperaturen. Als u de optimale groeitemperatuur niet kunt vinden met referentiemateriaal, probeer dan de platen bij 25 en 37 graden te incuberen.

Herhaal stap 4, telkens wanneer u vloeistof van een andere reageerbuis overbrengt op de bijbehorende plaat.
< h2> Populatieberekeningen

Neem de zes platen in overweging en kies degene met 30 tot 200 geïsoleerde kolonies.

Vermenigvuldig het aantal kolonies op de plaat met 10 om het aantal cellen per ml te berekenen. cultuur van de gebruikte verdunningsbuis.

Vermenigvuldig het aantal van stap 2 met 10 ^ (plaatnummer) om het aantal cellen per ml oorspronkelijke cultuur te berekenen. De waarde van 10 ^ (plaatnummer) is de verdunningsfactor van de cultuur die is gebruikt om die plaat te inoculeren.

Tip

Voeg alle vereiste voedingsstoffen toe aan de agarplaten. Auxotrofe bacteriën vereisen naast de basismedia-ingrediënten bepaalde aminozuren. Verschillende auxotrofen hebben verschillende voedingsbehoeften. Raadpleeg referentiemateriaal om erachter te komen welke aminozuren, indien aanwezig, uw bacteriën nodig hebben.

Wacht een seconde tussen het branden van de glazen staaf en het gebruik ervan, om de bacteriën niet te verbranden.

Waarschuwing

Draag altijd laboratoriumhandschoenen bij het omgaan met bacteriën.