Science >> Wetenschap >  >> Chemie

Wat is de functie van natriumacetaat bij DNA-isolatie?

Natriumacetaat speelt verschillende cruciale rollen in het proces van DNA-isolatie. Hier zijn de belangrijkste functies van natriumacetaat bij DNA-isolatie:

1. Precipitatie van nucleïnezuren: Wanneer natriumacetaat aan een DNA-oplossing wordt toegevoegd onder gecontroleerde temperatuur- en pH-omstandigheden, helpt het bij de precipitatie van nucleïnezuren (zowel DNA als RNA) uit de oplossing. Het vermindert de oplosbaarheid van DNA door de negatieve ladingen op de fosfaatruggengraat van het DNA-molecuul te neutraliseren. Hierdoor kan het DNA onoplosbare zouten vormen, die gemakkelijk kunnen worden gescheiden van de andere componenten van het cellysaat.

2. Verwijdering van verontreinigingen: Natriumacetaat helpt bij het verwijderen van verontreinigingen, zoals eiwitten, celresten en andere onzuiverheden, tijdens DNA-isolatie. Wanneer natriumacetaat wordt toegevoegd, blijven deze verontreinigingen in oplossing, terwijl het neergeslagen DNA door centrifugatie kan worden verzameld.

3. pH-controle: Natriumacetaat fungeert als buffer om de juiste pH te behouden tijdens DNA-isolatie. De optimale pH voor DNA-precipitatie ligt gewoonlijk tussen 5,0 en 5,2. Natriumacetaat helpt bij het handhaven van dit pH-bereik, wat cruciaal is voor efficiënte DNA-precipitatie.

4. Hoge zoutconcentratie: De hoge zoutconcentratie gecreëerd door natriumacetaat in de oplossing vergemakkelijkt de vorming van DNA-eiwitcomplexen. Deze complexen zijn essentieel voor de effectieve scheiding van DNA van andere celcomponenten.

5. Optimalisatie van DNA-herstel: Natriumacetaat draagt ​​bij aan de optimalisatie van de DNA-terugwinningsopbrengsten door niet-specifieke interacties tussen DNA en verontreinigingen te verminderen. Een juiste zoutconcentratie zorgt ervoor dat het DNA selectief wordt neergeslagen, waardoor het verlies van DNA tijdens het isolatieproces tot een minimum wordt beperkt.

6. Compatibiliteit met volgende stappen: Natriumacetaat is compatibel met daaropvolgende stappen in DNA-isolatie en -zuivering. Het neergeslagen DNA kan gemakkelijk worden gewassen, opnieuw worden opgelost in geschikte buffers en verder worden verwerkt voor stroomafwaartse toepassingen zoals PCR, enzymatische reacties of sequencing.

Over het algemeen speelt natriumacetaat een cruciale rol bij de precipitatie van DNA uit cellysaten tijdens DNA-isolatie. Het draagt ​​bij aan de effectieve scheiding van DNA van onzuiverheden, het handhaven van optimale pH-omstandigheden en het vergemakkelijken van de stroomafwaartse verwerking van het geïsoleerde DNA.