Door Chris Deziel Bijgewerkt op 24 maart 2022

toeytoey2530/iStock/GettyImages

Het kleuren van een preparaat vóór microscopisch onderzoek verbetert in de eerste plaats de zichtbaarheid, maar de voordelen ervan reiken veel verder dan het afbakenen van cellulaire grenzen.

Bepaalde kleurstoffen dringen door in de celwanden, verlichten interne structuren en stellen onderzoekers in staat de metabolische activiteit in situ te observeren.

Bovendien maken vlekken onderscheid tussen levensvatbare en niet-levensvatbare cellen.

Bovendien vergemakkelijkt kleuring een nauwkeurige opsomming van specifieke celpopulaties binnen een bepaalde biomassa.

Er zijn meer dan 20 verschillende kleurreagentia beschikbaar, elk op maat gemaakt voor een bepaalde diagnostische of onderzoeksdoelstelling.

TL;DR

Kleuring accentueert cellulaire structuren; De keuze van het reagens hangt af van het analytische doel.

Soorten vlekken

De keuze van de kleurstof hangt af van het specifieke kenmerk dat u wilt visualiseren. Niet alle kleuringen zijn compatibel met levende cellen, maar de kleuringen die dat wel zijn (waaronder Bismarck-bruin, tolueenrood, Nijlblauw, Nijlrood en DNA-bindende fluorescerende stoffen) worden veel gebruikt in de cytologie en histologie.

Sommige vlekken richten zich op sporen, andere benadrukken lipiden of eiwitten, terwijl een paar van kleur veranderen in de aanwezigheid van zetmeel. Een arts die een PAP-uitstrijkje uitvoert, zou bijvoorbeeld EosinY aanbrengen, een zure fluorescerende kleurstof die helder rood kleurt tegen rode bloedcellen, cytoplasma en celmembranen. Eosine Y wordt ook routinematig gebruikt bij analyse van beenmergaspiraten.

In veel gevallen is één enkele vlek niet voldoende. Hematoxyline kleurt bijvoorbeeld kernen blauw, en in combinatie met eosine produceert het een contrasterende rode of roze achtergrond waardoor kernen scherp opvallen. De gecombineerde hematoxyline-eosine (H&E) kleuring is een belangrijk onderdeel van de pathologie voor het onderzoeken van de weefselarchitectuur.

Gramkleuring

De kleuringsprocedure van Gram is een hoeksteen van de klinische microbiologie en maakt een snelle identificatie van bacteriële pathogenen mogelijk. De techniek maakt gebruik van een reeks kleurstoffen die Gram-positieve en Gram-negatieve organismen verschillend kleuren.

Eerst wordt kristalviolet aangebracht, waardoor alle cellen een uniform violet kleuren. Vervolgens werkt jodium als bijtmiddel, waardoor de kleurstof in de dikke peptidoglycaanlagen van Gram-positieve bacteriën (meestal Staphylococcus en Streptococcus) wordt opgesloten, zodat het violet achterblijft na ontkleuring. Ten slotte geeft een tegenkleuring zoals SafranineO een rode of roze tint aan Gram-negatieve cellen, waardoor een duidelijk contrast tussen de twee groepen ontstaat.

Kleuringsprocedure

Bij de voorbereiding van monsters kan sprake zijn van droge montage, natte montage, snijden of uitstrijken. Voor de meeste kleuringsprotocollen wordt de voorkeur gegeven aan een natte montage:plaats een druppel gedestilleerd water op het objectglaasje, positioneer het monster en dek af met een dekglaasje. Breng een druppel kleuroplossing aan op een hoek; capillaire werking trekt de kleurstof over het monster. Door een papieren handdoek op de andere kant van het glaasje te plaatsen, wordt overtollige vloeistof afgevoerd, waardoor een gelijkmatige verspreiding wordt gegarandeerd. Zodra de vlek volledig is doorgedrongen, is het objectglaasje klaar voor microscopische evaluatie.