Wanneer u een niet-gekarakteriseerd bacterieel isolaat tegenkomt, is een systematische aanpak die microscopie, kweek en moleculaire methoden combineert essentieel voor nauwkeurige identificatie.

1. Observeer fysieke eigenschappen

Begin met het onderzoeken van de samenstelling en vorm van de celwand en hoe cellen na deling met elkaar verbonden zijn. Deze basiskenmerken bieden de eerste aanwijzingen over de taxonomie van het organisme.

2. Breng de Gram Stain aan

De Gram-kleuring onderscheidt bacteriën met dikke peptidoglycaanwanden (Gram-positief) van bacteriën met dunne of afwezige wanden (Gram-negatief). Het is de hoeksteen van de bacteriële classificatie.

3. Onderzoek de morfologie

• Kokken – bolvormige cellen.
• Bacillen – rechte staven.
• Coccobacillen – korte, ovale staven.
• Spirilla – stijf, spiraalvormig; altijd Gram‑negatief.
• Spirocheten – flexibele, beweeglijke spiralen; meestal Gram-neutraal.
• Vibrio's – kommavormig; Gram-negatief.

Merk op dat elke vorm Gram-positief of Gram-negatief kan zijn, behalve spirilla die uitsluitend Gram-negatief is.

4. Beoordeel celkoppelingspatronen

Na deling vormen kokken en bacillen karakteristieke arrangementen:

• Diplococcen/Diplobacilli – paren.
• Streptokokken/Streptobacillen – kettingen.
• Tetrads – vierkanten van vier kokken.
• Sarcinae – blokjes van acht kokken.
• Stafylococcen – druifachtige trossen.

5. Cultuur op selectieve media

Inoculeer het isolaat op een reeks groeimedia die specifieke bacteriegroepen bevoordelen of remmen. Observeer de morfologie, kleur en groeisnelheid van de kolonie om de mogelijkheden te beperken.

6. Voer biochemische tests uit

Screen op metabolische bijproducten (bijvoorbeeld oxidase, catalase, koolhydraatfermentatie) om de identificatie verder te verfijnen. Veel laboratoria gebruiken geautomatiseerde panelen vanwege snelheid en nauwkeurigheid.

7. Bevestig met DNA-sequencing

Als de morfologie en biochemische gegevens niet doorslaggevend zijn, kan 16S-rRNA-sequencing of analyse van het hele genoom het isolaat definitief matchen met een bekende soort of een nieuwe stam onthullen, op voorwaarde dat er referentiegenomen bestaan.

Een isolaat dat Gram-negatief en aëroob is en rechte staafketens vormt, kan bijvoorbeeld worden geïdentificeerd als Escherichia coli na bevestiging van kweek en sequentiebepaling.

Sergej Nazarov/iStock/GettyImages