* Beperkingsenzymen: Deze enzymen werken als moleculaire schaar en snijden DNA bij specifieke sequenties. Ze zijn cruciaal voor het creëren van compatibele uiteinden op het plasmide en het belang van interesse.

* ligase: Dit enzym werkt als moleculaire lijm, verbindt de gesneden uiteinden van het plasmide en het gen aan elkaar en vormt een recombinant plasmide.

Laten we het proces afbreken:

1. Beperking Digest: Het plasmide en het belang van interesse worden gesneden met hetzelfde restrictie -enzym. Dit creëert compatibele plakkerige uiteinden, die korte, enkelstrengige overhangen zijn die met elkaar kunnen baseren.

2. ligatie: Het gesneden plasmide en gen worden gemengd met ligase -enzym. De ligase sluit zich aan bij de plakkerige uiteinden en vormt een cirkelvormig plasmide dat het nieuwe gen bevat.

Andere belangrijke enzymen:

* DNA -polymerase: Dit enzym kan worden gebruikt om gaten in het DNA in te vullen, vooral als de restrictie -digest stompe uiteinden creëert (zonder plakkerige overhangen).

* alkalische fosfatase: Dit enzym kan worden gebruikt om zelfligatie van het plasmide te voorkomen, wat kan gebeuren als het plasmide wordt gesneden met slechts één restrictie-enzym.

Samenvattend: De combinatie van restrictie -enzymen en ligase zijn de belangrijkste spelers bij het invoegen van een nieuw gen in een plasmide. Andere enzymen kunnen worden gebruikt, afhankelijk van de specifieke details van het kloneringsproces.