De belangrijkste reden dat u een monster kleurt voordat u het onder de microscoop legt, is om het beter te bekijken, maar kleuren doet veel meer dan alleen de contouren van cellen markeren. Sommige vlekken kunnen celwanden binnendringen en celcomponenten markeren, en dit kan wetenschappers helpen metabolische processen te visualiseren. Vlekken helpen ook onderscheid te maken tussen levende cellen en dode cellen. Bovendien kunnen wetenschappers met kleuring het aantal cellen van een bepaald type binnen een bepaalde biomassa tellen. Er zijn twintig of meer verschillende soorten vlekken en elke kleur heeft zijn doel.

TL; DR (te lang; niet gelezen)

Het belangrijkste doel van kleuring is cellen te markeren en delen van cellen. Er zijn meer dan 20 verschillende soorten vlekken en het type vlek dat u gebruikt, hangt af van wat u zoekt.
Soorten vlekken

De keuze van de vlek hangt af van wat u zoekt. Niet alle vlekken zijn geschikt voor levende cellen, maar die zijn onder meer Bismarck bruin, tolueenrood, Nijlblauw en Nijlrood en bepaalde fluorescerende middelen die worden gebruikt om DNA te markeren. Sommige vlekken markeren sporen, sommige detecteren lipiden en eiwitten en sommige veranderen van kleur in de aanwezigheid van zetmelen. Het doel van het onderzoek bepaalt het beste type vlek om te gebruiken. Een arts die bijvoorbeeld een PAP-uitstrijkje uitvoert, zou Eosin Y gebruiken. Het is een zure fluorescerende kleurstof die rood wordt wanneer deze in contact komt met rode bloedcellen, cytoplasma en celmembranen. Het wordt ook gebruikt om bloedmerg te testen.

In sommige gevallen kan een onderzoeker meer dan één vlek gebruiken. Hematoxyline is bijvoorbeeld een vlek die celkernen blauw maakt. Bij gebruik in combinatie met eosine, waardoor de andere delen van de cel rood of roze worden, zorgt het voor een sterker contrast en maakt het de kernen gemakkelijker te differentiëren. PAP-uitstrijkjes en bloedmonsters zijn gemakkelijker te onderzoeken wanneer deze twee vlekken samen worden gebruikt.

Gram-vlek: ziekenhuismedewerkers gebruiken Gram-vlek om schadelijke bacteriën te identificeren. Dit is eigenlijk een reeks kleurstoffen die verschillende effecten hebben op verschillende soorten bacteriën en artsen een belangrijk diagnostisch hulpmiddel geven. De vlek van Gram is een driedelig proces. In de eerste wordt Hucker's kristalviolet toegevoegd, waardoor alle bacteriën een uniforme violette kleur krijgen. In de volgende fase wordt jodiumkleuring toegevoegd, waardoor de kleur hecht aan Gram-positieve cellen, die voornamelijk Staphylococcus en Streptococcus zijn. De vlek wordt weggewassen, waardoor de Gram-positieve cellen met een duidelijke violette kleur achterblijven; vervolgens wordt een derde kleurstof, Safranine O, geïntroduceerd om het contrast tussen de gramnegatieve bacteriën en de rest van het materiaal in de dia te verbeteren.
Kleuringsprocedure

Wanneer u een specimen op een dia voorbereidt, kan het droog of nat monteren, je kunt het in een dunne sectie snijden of je kunt het smeren. Wanneer u een vlek gebruikt, is de gebruikelijke procedure om het monster nat te monteren, wat betekent dat er een druppel water op de dia wordt geplaatst, het monster in het water wordt geplaatst en bedekt met een dekglaasje. Breng vervolgens de vlek aan op een hoek van de dia met een druppelaar en laat deze door capillaire actie naar het monster worden getrokken. Het helpt om een papieren handdoek aan de andere kant van de dia te leggen om het water aan te trekken. Zodra de vlek zich over de hele dia heeft verspreid, is het monster klaar voor onderzoek.