Hoogwaardige vloeistofchromatografie is een techniek voor de laboratoriumanalyse van een mengsel. Het is een efficiënt type chromatografie die gebruik maakt van hoge druk, in plaats van alleen de zwaartekracht, om een ​​monster van een mengsel door een kolom te drijven. Er wordt een monster geïnjecteerd, en vervolgens helpt een pomp met grote hoeveelheden druk om het monster langs een gepakte kolom te verplaatsen, waar het wordt gescheiden in afzonderlijke componenten. Deze scheiding wordt vervolgens geanalyseerd door een detector om resultaten op te leveren.

Injectieplaats

Om te worden geïnjecteerd in een HPLC, moet een monster eerst worden opgelost in een polair vloeibaar oplosmiddel, bij voorkeur één met bekende HPLC-spectra zodat de gegevens ervan van de monsters kunnen worden onderscheiden. De vloeibare oplossing die het monster bevat, wordt in het instrument geplaatst en in de kolom gezonden. De feitelijke locatie van de injectieplaats is afhankelijk van het merk van instrumenten. In de meeste gevallen is het injectieproces geautomatiseerd, maar in sommige gevallen moet een laboratoriummedewerker het monster injecteren met een kleine injectienaald.

Pomponderdeel

Het pomponderdeel van de HPLC-eenheid is noodzakelijk omdat het de druk levert die het monster door de kolom voortstuwt. De pompsterkte varieert, maar een krachtige kan een druk van maximaal 6000 psi of pond per vierkante inch produceren, die wordt toegepast nadat het monster is geïnjecteerd. Hierdoor kan het monster sneller en efficiënter door de kolom worden gevoerd dan wanneer het door alleen de zwaartekracht zou druppelen.

Kolomomschrijving

De verhoogde snelheid van een monster ging door de kolom kolom door een pomp maakt het gebruik van een ander type kolom mogelijk dan die gebruikt in eenvoudige vloeistofchromatografie. Het verpakkingsmateriaal in de kolom kan een veel kleinere deeltjesgrootte hebben, hetgeen het oppervlaktegebied vergroot en derhalve interacties van het monster met de kolom ondersteunt. De meeste HPLC-kolommen werken door polariteit. Het monster wordt opgelost in een polair oplosmiddel en de kolom bestaat uit grotendeels niet-polaire koolwaterstoffen. De polaire delen van het monstermolecuul passeren zeer snel door de kolom omdat ze in de eerste plaats een interactie aangaan met het oplosmiddel, terwijl de niet-polaire componenten van het monster in de kolom blijven hangen, waardoor zwakke interacties met de kolomcomponenten worden gevormd. Daarom komen de componenten van het monster van de kolom af in de volgorde van de meeste polaire tot de meeste niet-polaire.

Detectorfunctie

Detectors variëren ook op basis van het type HPLC-instrument dat wordt gebruikt. De meeste functies werken echter op dezelfde basis. Een bron van ultraviolet licht schijnt op de gescheiden monstercomponenten als ze van de kolom komen. De meeste organische stoffen absorberen een bepaalde hoeveelheid licht, dus wanneer ze langs de toegepaste lichtbundel passeren, kan een detector oppikken hoeveel licht wordt geabsorbeerd. De detector registreert ook de retentietijd van de componenten op basis van de volgorde waarin ze van de kolom komen. Deze uitvoer kan vervolgens worden geanalyseerd op basis van piekoppervlakte om de exacte aard van de componenten van het monster te bepalen.