Science >> Wetenschap >  >> Chemie

Waarom ammoniumsulfaatzout meestal gebruikt in eiwitprecipitatie?

Ammoniumsulfaat ((NH₄) ₂SO₄) is een veel gebruikt reagens voor eiwitprecipitatie vanwege de unieke eigenschappen die het effectief en efficiënt maken:

1. Hoge oplosbaarheid: Ammoniumsulfaat is zeer oplosbaar in water, waardoor geconcentreerde oplossingen worden gemaakt. Deze hoge oplosbaarheid maakt de toevoeging van grote hoeveelheden zout aan een eiwitoplossing mogelijk, waardoor de ionsterkte wordt verhoogd en eiwitprecipitatie wordt bevorderd.

2. Zouteffect: Ammoniumsulfaat vertoont een sterk "uitzout" -effect. Dit betekent dat het de hydratatieschaal rond eiwitten verstoort, hun oplosbaarheid vermindert en ze dwingt om uit de oplossing neer te slaan. Het principe achter dit effect is dat de zoutionen concurreren met de eiwitmoleculen voor watermoleculen, wat leidt tot eiwitaggregatie en neerslag.

3. Selectieve neerslag: Door de ammoniumsulfaatconcentratie zorgvuldig te regelen, kan men selectief verschillende eiwitten neerslaan op basis van hun individuele oplosbaarheidseigenschappen. Dit zorgt voor de scheiding van eiwitten op basis van hun grootte, lading en hydrofobiciteit.

4. Zachte neerslag: Ammoniumsulfaatprecipitatie wordt in het algemeen beschouwd als een relatief zachte methode in vergelijking met andere neerslagtechnieken, zoals het gebruik van organische oplosmiddelen. Dit maakt het geschikt voor het behoud van de integriteit en activiteit van eiwitten.

5. Gebruiksgemak: Ammoniumsulfaat is direct beschikbaar, goedkoop en gemakkelijk te gebruiken. Het wordt ook gemakkelijk uit het neergepaalde eiwit verwijderd door dialyse of andere methoden, waardoor het een handige keuze is voor eiwitzuivering.

6. Eiwitstabilisatie: Interessant is dat bij lage concentraties ammoniumsulfaat de eiwitstabiliteit daadwerkelijk kan verbeteren door eiwitvouwen te bevorderen en aggregatie te verminderen.

7. Brede toepasbaarheid: Ammoniumsulfaatprecipitatie is een veelzijdige techniek die van toepassing is op een breed scala aan eiwitten, van kleine enzymen tot grote antilichamen.

Er zijn echter enkele beperkingen:

* Hoge zoutconcentraties kunnen schadelijk zijn voor sommige eiwitten.

* De methode is mogelijk niet geschikt voor alle eiwitten, met name die met een zeer lage oplosbaarheid of hoge gevoeligheid voor zout.

Over het algemeen maken het hoge oplosbaarheid, het uitzouten effect, selectiviteit, zachtheid, gebruiksgemak en brede toepasbaarheid van ammoniumsulfaat het een zeer effectief en algemeen gebruikt reagens voor precipitatie en zuivering van eiwitten.