PCR -componenten en hun functies:

1. Sjabloon DNA:

* functie: De DNA -sequentie die u wilt versterken. Het dient als de blauwdruk voor het polymerase -enzym om te kopiëren.

2. Primers:

* functie: Korte, enkelstrengige DNA-sequenties (typisch 18-30 nucleotiden) die complementair zijn aan specifieke regio's op het sjabloon-DNA. Ze binden aan het sjabloon -DNA en bieden een startpunt voor DNA -polymerase.

3. DNA -polymerase:

* functie: Een enzym dat nieuwe DNA -strengen synthetiseert met behulp van het sjabloon -DNA en primers. Het voegt nucleotiden toe aan het 3 'uiteinde van de primer in een 5' tot 3 'richting.

4. Deoxynucleoside trifosfaten (DNTP's):

* functie: Bouwstenen van DNA. Ze bestaan ​​uit vier soorten:DATP, DCTP, DGTP en DTTP, die de vier basen vertegenwoordigen (adenine, cytosine, guanine en thymine). Het DNA -polymerase gebruikt deze om de nieuwe DNA -strengen samen te stellen.

5. Bufferoplossing:

* functie: Bevat zouten en ionen die de juiste pH- en ionsterkte handhaven voor optimale DNA -polymerase -activiteit.

6. Magnesiumchloride (MGCL2):

* functie: Een cofactor voor DNA -polymerase, vereist voor zijn katalytische activiteit. Het helpt ook de DNA -structuur te stabiliseren.

7. Water:

* functie: Oplosmiddel voor de reactie en biedt een medium voor de componenten om te interageren.

Hier is een korte samenvatting van het PCR -proces:

1. denaturation: Het reactiemengsel wordt verwarmd tot 94-98 ° C, dat het dubbelstrengige sjabloon-DNA scheidt in enkele strengen.

2. gloeien: De temperatuur wordt verlaagd tot 50-65 ° C, waardoor de primers kunnen binden aan hun complementaire sequenties op het enkelstrengige sjabloon-DNA.

3. Extensie: De temperatuur wordt verhoogd tot 72 ° C, de optimale temperatuur voor het DNA -polymerase. De polymerase breidt de primers uit en voegt DNTP's toe om nieuwe DNA -strengen te maken.

Deze drie stappen worden herhaald voor meerdere cycli, wat resulteert in exponentiële versterking van de doel -DNA -sequentie.