1. Antibioticaresistentiemarkers:

* principe: Deze methode is gebaseerd op het invoegen van een antibioticaresistentiegen samen met het gewenste gen in de vector. Cellen die met succes de recombinante vector opnemen, zullen ook resistentie tegen het specifieke antibioticum verwerven.

* Procedure: Cellen worden gekweekt op media die het antibioticum bevatten. Alleen cellen die de recombinante vector hebben opgenomen en het resistentiegen tot expressie brengen, zullen overleven en kolonies vormen.

* Voorbeeld: Het veelgebruikte ampicillineresistentiegen (AMPR) maakt bacteriën in staat om te overleven in aanwezigheid van ampicilline.

2. Reportergenen:

* principe: Reportergenen coderen voor eiwitten die een detecteerbaar signaal produceren, waardoor cellen een eenvoudige identificatie mogelijk maken die het recombinant -DNA bevatten.

* Procedure: Reportergenen zijn vaak gekoppeld aan het gewenste gen, dus de expressie van het reportergen duidt op een succesvolle invoeging van het recombinante DNA.

* Voorbeelden:

* lacz -gen: Codeert beta-galactosidase, dat een substraat (X-GAL) afbreekt om een ​​blauwe kleur te produceren.

* GFP -gen: Codeert groen fluorescerend eiwit, waardoor cellen groen gloeien onder UV -licht.

3. Kleurselectie:

* principe: Deze methode maakt gebruik van een genetisch systeem waarbij de aanwezigheid van het recombinante DNA de kleur van de cellen verandert.

* Procedure: Cellen die het recombinant -DNA bevatten, vertonen een andere kleur dan cellen zonder deze.

* Voorbeeld: De blauw-witte screeningmethode gebruikt een vector met het LACZ-gen verstoord door de invoegingsplaats voor het recombinante DNA. Cellen met het recombinante DNA zullen witte kolonies produceren, terwijl cellen zonder blauwe kolonies produceren.

4. Complementatie:

* principe: Deze methode wordt gebruikt wanneer het gewenste gen vereist is om de cel te overleven of een specifiek product te produceren.

* Procedure: Cellen die een functioneel gen missen, worden getransformeerd met de recombinante vector die het gen bevat. Alleen cellen met het functionele gen zullen overleven of het gewenste product produceren.

* Voorbeeld: Een stam van bacteriën die een specifiek enzym missen, kan worden getransformeerd met een vector die het gen bevat dat codeert voor het enzym. Alleen de getransformeerde bacteriën zullen kunnen overleven en groeien.

5. Fluorescentie geactiveerde celsorte (FACS):

* principe: FACS maakt gebruik van fluorescentie -labeling om cellen te identificeren en te sorteren op basis van specifieke kenmerken.

* Procedure: Cellen die het gewenste gen tot expressie brengen (gekoppeld aan een fluorescerende marker) zijn gesorteerd uit de rest op basis van hun fluorescentie -eigenschappen.

* Voordelen: Screening met hoge doorvoer, precieze scheiding en efficiënte sortering van cellen.

6. PCR -screening:

* principe: PCR kan worden gebruikt om een ​​specifieke DNA -sequentie te amplificeren, wat de aanwezigheid van het recombinante DNA bevestigt.

* Procedure: DNA wordt geëxtraheerd uit cellen en geamplificeerd met behulp van primers die specifiek zijn voor het ingevoegde gen. De aanwezigheid van het versterkte product duidt op een succesvolle invoeging.

De keuze van de selectiemethode hangt af van het specifieke experiment, de gebruikte vector en het gewenste resultaat.