Het principe van de glucose-6-fosfaatdehydrogenase (G6PD)-test is gebaseerd op de enzymatische reactie die wordt gekatalyseerd door G6PD. G6PD is een enzym dat een cruciale rol speelt in de pentosefosfaatroute, een metabolische route die verantwoordelijk is voor het genereren van NADPH, een reductiemiddel.

In deze test katalyseert G6PD de oxidatie van glucose-6-fosfaat (G6P) naar 6-fosfogluconaat (6-PG) met behulp van NADP+ als elektronenacceptor. Tijdens deze reactie wordt NADP+ gereduceerd tot NADPH, dat een sterke absorptie vertoont bij 340 nm. Door de toename van de absorptie bij 340 nm in de loop van de tijd te meten, kan de enzymactiviteit van G6PD worden gekwantificeerd.

Dit zijn de belangrijkste stappen die betrokken zijn bij de G6PD-test:

1. Monstervoorbereiding: Er wordt een monster bereid dat G6PD bevat, zoals een cellysaat of weefselhomogenaat.

2. Reactiemengsel: Het reactiemengsel omvat doorgaans G6P, NADP+, een bufferoplossing en het monster dat G6PD bevat.

3. Incubatie: Het reactiemengsel wordt bij een specifieke temperatuur en pH geïncubeerd, waardoor de enzymatische reactie kan plaatsvinden.

4. Spektrofotometrische meting: De absorptie van het reactiemengsel wordt gemeten bij 340 nm met behulp van een spectrofotometer. Deze absorptiewaarde komt overeen met de geproduceerde hoeveelheid NADPH.

5. Berekeningen: De verandering in absorptie bij 340 nm in de loop van de tijd wordt gebruikt om de enzymactiviteit van G6PD te berekenen. Bij deze berekening wordt rekening gehouden met de uitdovingscoëfficiënt van NADPH en het volume van het reactiemengsel.

6. Eenheden van enzymactiviteit: G6PD-activiteit wordt gewoonlijk uitgedrukt in eenheden per liter (U/L) of internationale eenheden per liter (IU/L), waarbij één eenheid enzymactiviteit de hoeveelheid enzym vertegenwoordigt die nodig is om 1 micromol NADPH per minuut te produceren onder de gespecificeerde testomstandigheden .

Het meten van G6PD-activiteit heeft klinische betekenis, omdat tekortkomingen in G6PD kunnen leiden tot een aandoening die bekend staat als G6PD-deficiëntie, die hemolytische anemie veroorzaakt bij blootstelling aan bepaalde medicijnen of stoffen. G6PD-tests worden uitgevoerd om G6PD-deficiëntie te diagnosticeren en de enzymactiviteit bij personen met de aandoening te controleren.