Door Tammie Painter • Bijgewerkt op 24 maart 2022

cgj0212/iStock/GettyImages

Hogedrukvloeistofchromatografie (HPLC) en gaschromatografie (GC) zijn fundamentele analytische technieken die moleculen scheiden op basis van hun interactie met een stationaire fase en een mobiele fase. Hoewel het kernprincipe (zwaardere of minder polaire verbindingen die langzamer elueren) identiek blijft, verschillen de twee methoden aanzienlijk qua operationele parameters, kolomontwerp en monstercompatibiliteit.

Mobiele fase

HPLC maakt gebruik van een vloeibare mobiele fase, doorgaans een mengsel van organisch oplosmiddel (bijvoorbeeld acetonitril of methanol), ultrazuiver water en additieven die de oplosbaarheid en compatibiliteit met de analyt optimaliseren. GC gebruikt daarentegen een gasvormige mobiele fase; Veel voorkomende dragers zijn onder meer helium, stikstof, argon of waterstof, gekozen op basis van de vluchtigheid van de analyt en de detectorvereisten.

Kolommen

HPLC-kolommen zijn gewoonlijk 10 tot 15 cm lange metalen of glazen buizen gevuld met stationaire silica- of polymere fasen. GC-kolommen daarentegen zijn opgerolde capillaire buizen waarvan de binnenwanden zijn bedekt met stationaire fasen die zijn afgestemd op de analyse. Deze haarvaten kunnen zich tot wel 30 meter uitstrekken en bieden een hoge resolutie voor vluchtige verbindingen.

Voorbeeld van compatibiliteit

GC is ideaal voor vluchtige, thermisch stabiele analyten:kleine organische moleculen, gassen en laagkokende vloeistoffen. Niet-vluchtige, hoogmoleculaire of geladen soorten (bijvoorbeeld zouten, peptiden) zijn beter geschikt voor HPLC, die waterige en ionische matrices kan verwerken zonder de noodzaak van derivatisering.

Temperatuurregeling

GC-kolommen bevinden zich in een oven; de temperatuur is nauwkeurig geprogrammeerd om de scheiding te optimaliseren, waarbij hogere temperaturen de elutie versnellen, maar de afbraak van de analyt riskeren. HPLC-kolommen worden doorgaans op omgevingstemperatuur of gecontroleerde kamertemperatuur gehouden, waardoor een consistente interactie tussen de mobiele fase en de stationaire fase wordt gegarandeerd.