1. Cellyse:

- Verzamel uw materialen, waaronder een monster cellen (plantaardig of dierlijk weefsel), zout, vloeibaar afwasmiddel en een DNA-extractiebuffer (TE-buffer of Tris-EDTA-buffer).

- Plaats een klein stukje van het weefselmonster in een vijzel en stamper of een klein bakje met deksel.

- Voeg een kleine hoeveelheid zout toe aan het monster (ongeveer 1/4 theelepel per 1 gram weefsel).

- Voeg een paar druppels vloeibaar afwasmiddel toe aan het mengsel en maal of pureer het weefsel grondig.

- Deze stap breekt de celmembranen open, waardoor het DNA vrijkomt.

2. Eiwitneerslag:

- Breng het lysaat (het mengsel van gebroken cellen) over naar een centrifugebuis.

- Voeg een volume koude DNA-extractiebuffer toe dat gelijk is aan het volume van het lysaat. Meng grondig.

- De DNA-extractiebuffer bevat detergentia die helpen bij het oplossen van celmembranen en eiwitten, evenals een zoutoplossing die helpt eiwitten (inclusief histonen geassocieerd met DNA) uit de oplossing te precipiteren.

- De eiwitten vormen een klontje en scheiden zich af van het DNA.

3. DNA-precipitatie:

- Centrifugeer het mengsel enkele minuten op hoge snelheid (ongeveer 12.000–15.000 tpm).

- Hierdoor vormen de neergeslagen eiwitten en celresten een pellet op de bodem van de buis, waardoor het DNA in het supernatant (de vloeistof boven de pellet) achterblijft.

4. DNA-verzameling:

- Verwijder voorzichtig het supernatant, dat het DNA bevat, in een nieuw buisje.

- Vermijd het overbrengen van iets van de pellet, aangezien deze voornamelijk eiwitten en celresten bevat.

- Het DNA bevindt zich nu in een relatief zuivere vorm, vrij van de meeste cellulaire componenten en eiwitten.

Ethanolextractie:

1. DNA-precipitatie:

- Voeg aan het buisje met de DNA-oplossing van de zoutzeepextractie een gelijk volume koude 95%-100% ethanol toe.

- Meng voorzichtig door de buis meerdere keren om te keren. Niet vortexen, omdat hierdoor het DNA kan worden gescheurd.

- Het DNA zal als een witte, draderige massa uit de oplossing neerslaan.

2. DNA-wassen:

- Centrifugeer het mengsel enkele minuten op hoge snelheid (ongeveer 12.000–15.000 tpm).

- Het DNA vormt een pellet op de bodem van het buisje. verwijder voorzichtig het supernatant (de ethanoloplossing) zonder de pellet te verstoren.

3. DNA-drogen:

- Spoel de DNA-pellet voorzichtig af met koude 70% ethanol om eventuele resterende zouten te verwijderen.

- Centrifugeer kort om het DNA op de bodem van het buisje te verzamelen.

- Verwijder voorzichtig de ethanol zonder de pellet te verstoren.

- Laat de DNA-pellet een paar minuten aan de lucht drogen.

4. DNA-resuspensie:

- Voeg een kleine hoeveelheid DNA-extractiebuffer (TE-buffer of Tris-EDTA-buffer) toe aan het buisje met de DNA-pellet.

- Gebruik een micropipet om het DNA voorzichtig te resuspenderen door op en neer te pipetteren totdat het volledig is opgelost.

- Het DNA is nu klaar voor verdere analyse, zoals PCR, gelelektroforese of andere moleculair biologische technieken.

Beide methoden zijn gericht op het verstoren van het celmembraan, het vrijgeven van DNA en het vervolgens scheiden van het DNA van andere cellulaire componenten door middel van precipitatie en centrifugatie. Ze bieden een eenvoudige en kosteneffectieve manier om DNA te extraheren voor basisexperimenten en educatieve doeleinden.