1. Het isoleren van het menselijke insulinegen:

* Het gen identificeren: Onderzoekers moesten eerst de exacte DNA -sequentie vaststellen die codeert voor menselijke insuline. Dit omvatte het bestuderen van het menselijke genoom en het begrijpen van de structuur van het insuline -eiwit.

* het gen klonen: Nadat het gen was geïdentificeerd, gebruikten ze technieken zoals restrictie -enzymen en plasmiden om het insulinegen uit menselijk DNA uit te snijden en in een klein, cirkelvormig stuk DNA te plaatsen dat een plasmide wordt genoemd. Dit creëerde een recombinant DNA -molecuul.

2. Een geschikte bacteriële gastheer kiezen:

* e. coli als het werkpaard: De bacterie * Escherichia coli * (E. coli) werd gekozen als het gastorganisme. Het is een goed bestudeerde, gemakkelijk gemanipuleerde en snel reproducerende bacterie, waardoor het ideaal is voor grootschalige productie.

3. Het gen in bacteriën invoegen:

* Transformatie: Het recombinante plasmide dat het menselijke insulinegen bevatte, werd geïntroduceerd in E. coli -cellen. Dit proces, transformatie genoemd, omvatte het creëren van omstandigheden waarbij de bacteriën het plasmide zouden opnemen.

4. Selecteren voor transgene bacteriën:

* Antibioticaresistentie: Het plasmide bevatte vaak een gen voor antibioticaresistentie. Hierdoor konden onderzoekers gemakkelijk bacteriën identificeren die het plasmide met succes hadden opgenomen. Ze zouden de bacteriën laten groeien in aanwezigheid van het antibioticum, en alleen die bacteriën met het plasmide zouden overleven.

5. Het insuline -gen tot expressie brengen:

* promoters en regelgeving: Het plasmide werd zo ontworpen dat het menselijke insulinegen tot expressie zou worden gebracht (ingeschakeld) in de E. coli. Dit omvatte inclusief een promotorsequentie - een DNA -gebied dat de bacteriële machines vertelt om het insulinegen te lezen en te transcriberen.

6. Insuline produceren en zuiveren:

* Grootschalige gisting: De transgene E. coli -bacteriën werden gekweekt in grote fermentatietanks, waardoor ze grote hoeveelheden insuline konden produceren.

* zuivering: Na fermentatie moest de door de bacteriën geproduceerde insuline worden gezuiverd uit de rest van de bacteriële componenten. Dit omvatte verschillende technieken zoals chromatografie en filtratie.

Belangrijke opmerking: Dit is een vereenvoudigd overzicht. Het proces omvatte tal van technische details, iteraties en uitdagingen, en veel briljante wetenschappers hebben bijgedragen aan het succes ervan.