Pre-gekleurde eiwitten:kant-en-klare eiwitmarkers voor gelelektroforese

Pre-bevlekte eiwitten zijn eiwitmengsels die covalent zijn gekoppeld aan een kleurstof . Hierdoor kunnen ze direct worden gevisualiseerd op een gel , het elimineren van de noodzaak van afzonderlijke kleurprocedures. Ze worden vaak gebruikt als molecuulgewichtsmarkers in gelelektroforese, met name SDS-PAGE (Natriumdodecylsulfaat-polyacrylamidegelelektroforese).

Hier is een uitsplitsing van belangrijke aspecten:

1. Waarom pre-bevlekte eiwitten gebruiken?

* Gemak: Geen afzonderlijke kleuring vereist, tijd en moeite besparen.

* Visuele tracking: Hiermee kunt u de voortgang van uw eiwitscheiding volgen tijdens elektroforese.

* Bepaling van nauwkeurige maat: Biedt referentiepunten voor het bepalen van het molecuulgewicht van onbekende eiwitten.

* Problemen oplossen: Kan helpen bij het identificeren van potentiële problemen in uw elektroforese -opstelling, zoals onjuiste gelbelasting of ongelijkmatig gebruik.

2. Hoe vooraf bevlekte eiwitten werken:

* kleurstofconjugatie: De eiwitten zijn covalent gekoppeld aan een kleurstof, meestal een fluorescerende of gekleurde kleurstof.

* Elektroforetische mobiliteit: De kleurstof verandert de elektroforetische mobiliteit van het eiwit niet significant, wat betekent dat ze migreren volgens hun molecuulgewicht.

* Visualisatie: De kleurstof maakt directe visualisatie van de eiwitbanden op de gel mogelijk, hetzij onder UV -licht of met zichtbaar licht.

3. Belangrijkste kenmerken van vooraf bevlekte eiwitten:

* Molecuulgewichtbereik: Beschikbaar in verschillende bereiken die aan verschillende experimentele behoeften voldoen.

* kleurstofeigenschappen: De gebruikte kleurstof beïnvloedt de gevoeligheid en zichtbaarheid van de banden.

* stabiliteit: Sommige vooraf bevlekte eiwitten zijn stabieler dan andere en zijn bestand tegen zware omstandigheden.

* Compatibiliteit: Zorg voor compatibiliteit met uw elektroforese buffer en geltype.

4. Toepassingen van vooraf bevlekte eiwitten:

* SDS-PAGE MOLECULAIRE GEWICHT MARKERS: De meest voorkomende toepassing.

* Western -blotting: Gebruikt als een maatreferentie voor overgedragen eiwitten.

* Monitoring van eiwitzuivering: Om eiwitmigratie te volgen tijdens zuiveringsprocedures.

* gelelektroforese probleemoplossing: Help bij het diagnosticeren van problemen zoals ongelijke gelbelasting.

5. Soorten vooraf bevlekte eiwitmarkers:

* regenboogmarkeringen: Bevat een mix van eiwitten met verschillende kleuren voor eenvoudige identificatie van elke band.

* Markers met één kleur: Bevat een enkele kleurstof en zorg voor minder visuele differentiatie, maar kan nuttig zijn voor specifieke toepassingen.

6. Voordelen van het gebruik van vooraf bevlekte eiwitten:

* vereenvoudigde workflow: Elimineert afzonderlijke kleurstappen en bespaart tijd en moeite.

* Visuele tracking: Maakt realtime monitoring van eiwitscheiding mogelijk tijdens elektroforese.

* Betaling van betrouwbare grootte: Biedt nauwkeurige referenties voor molecuulgewicht.

* Hulp bij probleemoplossing: Helpt bij het identificeren van potentiële problemen in de elektroforese -opstelling.

7. Nadelen van het gebruik van vooraf bevlekte eiwitten:

* kosten: Kan duurder zijn dan traditionele eiwitstandaarden.

* Gevoeligheid: Is misschien niet zo gevoelig als traditionele eiwitstandaarden, vooral voor eiwitten met weinig overvloed.

* kleurstofinterferentie: De kleurstof kan interfereren met bepaalde stroomafwaartse toepassingen, zoals eiwitsequencing of massaspectrometrie.

Over het algemeen zijn vooraf bevlekte eiwitten een handig en waardevol hulpmiddel voor onderzoekers die werken met gelelektroforese. Ze bieden een eenvoudige en betrouwbare manier om eiwitmigratie te volgen en het molecuulgewicht te bepalen. Het is echter belangrijk om de juiste marker voor uw specifieke toepassing te kiezen en de potentiële beperkingen te overwegen.