Vrije of bewegende grenselektroforese

Vrije of bewegende grenselektroforese is een type elektroforese -techniek die afhankelijk is van de beweging van een scherpe grens tussen een oplossing die de analyt bevat (de substantie van interesse) en een bufferoplossing . Deze techniek is ontwikkeld door arne tiselius In de jaren dertig en verdiende hem de Nobelprijs voor chemie in 1948 .

Hier is hoe het werkt:

1. Voorbereiding: Een oplossing die de analyt bevat, is gelaagd op een bufferoplossing in een verticale glazen buis. De twee oplossingen hebben verschillende brekingsindices, waardoor een zichtbare grens ontstaat.

2. elektroforese: Een elektrisch veld wordt over de buis aangebracht. De geladen analytmoleculen migreren naar de elektrode met de tegenovergestelde lading.

3. Migratie: De analytmoleculen bewegen door de bufferoplossing, waardoor A bewegende grens ontstaat dat kan worden waargenomen met behulp van Schlieren Optics . Deze techniek maakt gebruik van lichtbreking om de grens te visualiseren en de beweging ervan te meten.

4. Analyse: De migratiesnelheid van de grens is evenredig met de elektroforetische mobiliteit van de analyt , die wordt bepaald door zijn lading en grootte. Deze informatie kan worden gebruikt om verschillende componenten in het analytmengsel te identificeren en te kwantificeren.

Belangrijke kenmerken van vrije of bewegende grenselektroforese:

* Geen ondersteunend medium: De analy migreert door een vloeibare buffer, in tegenstelling tot andere elektroforese -technieken die gels of membranen gebruiken.

* scherpe grens: De aanwezigheid van een afzonderlijke grens zorgt voor een nauwkeurige meting van de migratie van de analyt.

* Kwantitatieve analyse: De techniek is geschikt voor kwantitatieve analyse van verschillende componenten in een mengsel.

* Beperkte resolutie: In vergelijking met andere elektroforese -technieken heeft bewegende grenselektroforese een beperkte resolutie voor het scheiden van complexe mengsels.

Toepassingen:

* eiwitkarakterisering: Het bepalen van de zuiverheid en homogeniteit van eiwitoplossingen.

* iso -elektrische focus: Het identificeren van het iso -elektrische punt van eiwitten.

* Serumeiwitanalyse: Het bestuderen van de samenstelling van serum -eiwitten in klinische toepassingen.

Beperkingen:

* Beperkte resolutie: In vergelijking met andere technieken heeft het een lager oplossend vermogen voor complexe mengsels.

* Technische uitdagingen: Vereist gespecialiseerde apparatuur en precieze experimentele omstandigheden.

* tijdrovend: Het proces kan relatief tijdrovend zijn.

Moderne technieken:

Hoewel vrije of bewegende grenselektroforese in zijn tijd een significante doorbraak was, is het grotendeels vervangen door meer geavanceerde en veelzijdige elektroforese -technieken, zoals gelelektroforese en capillaire elektroforese . Deze technieken bieden een hogere resolutie, eenvoudiger werking en bredere toepasbaarheid.

De historische betekenis van vrije of bewegende grenselektroforese blijft echter bestaan ​​omdat het de weg heeft geëffend voor de ontwikkeling van moderne elektroforese -technieken die tegenwoordig op grote schaal op verschillende gebieden worden gebruikt.