science >> Wetenschap >  >> Fysica

Hoe HPLC-resoluties berekenen

Chemici gebruiken hogedrukvloeistofchromatografie of HPLC om mengsels van verbindingen te scheiden. Over het algemeen bestaat de methode uit het injecteren van een monster in een kolom waar het mengt met een of meer oplosmiddelen. Verschillende verbindingen adsorberen, of "plakken", aan de kolom in verschillende mate; en als het oplosmiddel de verbindingen door de kolom duwt, zal een van de componenten van het mengsel als eerste de kolom verlaten. Het instrument detecteert de verbindingen wanneer ze de kolom verlaten en produceert een chromatogram dat bestaat uit een plot met retentietijd op de x-as en signaalintensiteit van de detector op de y-as. Naarmate de verbindingen de kolom verlaten, produceren ze "pieken" in het chromatogram. Over het algemeen geldt: hoe verder uit elkaar en hoe smaller de pieken in het chromatogram, hoe hoger de resolutie. Wetenschappers beschouwen een resolutie van 1,0 of hoger als een adequate scheiding.

Meet de breedten van twee aangrenzende pieken in het chromatogram door op te merken waar de x-aswaarden zich aan de basis van elke piek bevinden. De x-as vertegenwoordigt retentietijd, meestal gemeten in seconden. Dus, als een piek begint bij 15,1 seconden en eindigt bij 18,5 seconden, is de breedte (18,5 - 15,1) = 3,4 seconden.

Bepaal de retentietijden door de tijd te noteren, dwz de locatie op de x- as, die overeenkomt met de locaties van de maxima van de pieken. Deze waarde zal normaal ongeveer halverwege zijn tussen de twee waarden die worden gebruikt om de breedte in stap 1 te berekenen. Het voorbeeld in stap 1 zou bijvoorbeeld een maximum vertonen van ongeveer 16,8 seconden.

Bereken de resolutie, R , tussen twee pieken door

R = (RT1 - RT2) /[0.5 * (W1 + W2)],

waarbij RT1 en RT2 de retentietijden van pieken 1 en 2 vertegenwoordigen, en W1 en W2 vertegenwoordigen de breedtes van de pieken genomen aan hun basis. Bij voortzetting van het voorbeeld uit stappen 2 en 3, vertoont één piek een retentietijd van 16,8 seconden en een breedte van 3,4 seconden. Als de tweede piek een retentietijd van 21,4 seconden met een breedte van 3,6 seconden vertoonde, zou de resolutie zijn:

R = (21,4 - 16,8) /[0,5 * (3,4 + 3,6)] = 4,6 /3,5 = 1.3.