methoden voor het verkrijgen van eencellige klonen

1. verdunning klonen (beperkte verdunning)

- principe: Het verdunnen van de celsuspensie tot een concentratie die laag genoeg is dat individuele cellen worden gescheiden en in afzonderlijke putjes of vlekken worden uitgeplaat.

- Procedure:

- 1. Voorbereiding: Bepaal de geschatte celconcentratie van uw cultuur met behulp van een hemocytometer of celteller.

- 2. Verdunning: Bereken de verdunningsfactor die nodig is om een gewenste celdichtheid te bereiken (bijv. 1 cel per putje). Vermijd uw celophanging dienovereenkomstig.

- 3. Plating: Plaat de verdunde cellen in een plaat met meerdere putjes (96 putjes, 24-putjes, enz.) Of op een petrischaal.

- 4. Incubatie: Laat de cellen groeien en vormen kolonies.

- 5. Selectie: Identificeer putten of gebieden met enkele kolonies (één cel gaf aanleiding tot de hele kolonie).

2. Micromanipulatie (microscopische selectie)

- principe: Een microscoop en een micromanipulator gebruiken om een enkele cel fysiek op te pakken en over te dragen naar een nieuw groeimedium.

- Procedure:

- 1. Voorbereiding: Gebruik een microscoop met een micromanipulator.

- 2. Celselectie: Identificeer een enkele cel van belang onder de microscoop.

- 3. Isolatie: Gebruik de micromanipulator zorgvuldig om de cel op te pakken.

- 4. Overdracht: Breng de cel over naar een nieuw groeimedium (bijv. Een kleine kweekgerecht of een microtube).

- 5. Incubatie: Laat de cel uitgroeien tot een kolonie.

3. Flowcytometrie-gebaseerde sorteren

- principe: Een flowcytometer gebruiken om cellen te sorteren op basis van specifieke kenmerken (bijv. Grootte, fluorescentie).

- Procedure:

- 1. Labeling: Label cellen met fluorescerende markers om ze te onderscheiden van anderen.

- 2. Sorteren: Voer de celsuspensie door de flowcytometer. Het instrument analyseert en scheidt cellen op basis van de opgegeven parameters.

- 3. Verzameling: Verzamel cellen van belang in een nieuw groeimedium.

- 4. Incubatie: Laat de cellen groeien in kolonies.

Overwegingen voor klonering met één cel

* Celtype: Verschillende celtypen hebben verschillende groeimannen. Sommige zijn gevoeliger voor isolatie dan andere.

* Groeimedium: De keuze van het kweekmedium is van cruciaal belang voor het ondersteunen van een groei van eencellen.

* Kloonzuiverheid: Zorg ervoor dat de geselecteerde kolonies afkomstig zijn van een enkele cel.

* tijd: Klonen kan tijd kosten, omdat afzonderlijke cellen zich moeten vermenigvuldigen tot een kolonie.

* Toepassingen:

- Celline Development: Pure cellijnen maken met specifieke eigenschappen.

- Drugscreening: Het testen van medicijneffecten op individuele cellen.

- genetisch onderzoek: Het bestuderen van genexpressie en mutaties op het niveau van één cel.

Laat het me weten als u meer details wilt over een van deze methoden of vragen heeft over specifieke toepassingen!