Historisch gezien , chloroform werd gebruikt als onderdeel van een fenol-chloroformextractie methode. Hier is hoe het werkte:

* cellysis: De eerste stap omvatte het openbreken van de cellen om het DNA vrij te geven.

* fenol: Fenol werd vervolgens aan het mengsel toegevoegd. Fenol is een sterk denaturant dat eiwitten van het DNA scheidt.

* chloroform: Chloroform is toegevoegd om een ​​ bifasisch systeem te maken , wat betekent dat er twee lagen worden gevormd. De bovenste laag bevatte de waterige oplossing met het DNA, terwijl de onderste laag het fenol en gedenatureerde eiwitten bevatte.

Waarom chloroform niet langer wordt gebruikt:

* Veiligheid: Chloroform is een giftige en carcinogene verbinding, die een aanzienlijk risico voor onderzoekers met zich meebrengt.

* Efficiëntie: Moderne methoden zoals spinkolommen of op magnetische kraal gebaseerde extractie zijn veel sneller, eenvoudiger en veiliger dan fenol-chloroformmethoden. Deze technieken zijn afhankelijk van verschillende principes om DNA te isoleren.

In plaats van chloroform gebruikt moderne DNA -extractie:

* buffers: Buffers worden gebruikt om de juiste pH- en zoutconcentratie te creëren tot lysecellen en scheiden DNA van andere cellulaire componenten.

* enzymen: Enzymen zoals proteïnase K worden gebruikt om eiwitten te verteren, waardoor DNA verder wordt gescheiden van andere cellulaire componenten.

* spin kolommen of magnetische kralen: Deze materialen binden aan DNA, waardoor de isolatie en zuivering van de rest van het monster mogelijk is.

Samenvattend, hoewel chloroform ooit werd gebruikt bij DNA -extractie, wordt het niet langer beschouwd als een veilige of efficiënte methode. Moderne DNA -extractietechnieken maken gebruik van alternatieve methoden om dezelfde resultaten te bereiken met een grotere veiligheid en gemak.