HPLC biedt een snelle, geautomatiseerde en uiterst nauwkeurige methode om bepaalde chemische componenten in een monster te identificeren, maar het kan kostbaar en complex zijn en werkt niet voor alle monsters. Medische, forensische, milieu- en productielabs gebruiken de techniek om de chemicaliën in een monster te kwantificeren en te scheiden. HPLC heeft zowel voordelen als nadelen in vergelijking met andere technieken.

HPLC en vergelijkbare technieken

Net als andere vormen van chromatografie, maakt HPLC de scheiding mogelijk van chemische bestanddelen door het gebruik van een mobiele fase en een stationaire fase. De mobiele fase is vloeibaar en de stationaire fase is vast. Omdat de verschillende componenten met verschillende snelheden bewegen, scheiden ze van elkaar. Alternatieve technieken omvatten capillaire elektroforese, waarbij stoffen migreren door oplossingen in een elektrisch veld, en andere chromatografische methoden zoals vaste fase-extractie, gaschromatografie en dunnelaagchromatografie.

Snelheid, efficiëntie en nauwkeurigheid

Vergeleken met andere chromatografische technieken, zoals TLC, is HPLC extreem snel en efficiënt. Het gebruikt een pomp in plaats van de zwaartekracht om een ​​vloeibaar oplosmiddel door een vast adsorbensmateriaal te duwen, waarbij verschillende chemische componenten worden afgescheiden terwijl ze met verschillende snelheden bewegen. Het proces kan in ongeveer 10 tot 30 minuten worden voltooid en levert een hoge resolutie. Het is nauwkeurig en zeer reproduceerbaar. Omdat het grotendeels geautomatiseerd is, kunnen standaard HPLC-runs worden uitgevoerd met minimale training.

Kosten en complexiteit

Ondanks de voordelen ervan kan HPLC duur zijn, waardoor grote hoeveelheden dure organische stoffen nodig zijn. Technieken zoals vaste fase-extractie en capillaire elektroforese kunnen goedkoper en zelfs sneller zijn, vooral voor analyse onder goede productiepraktijken. Hoewel het relatief eenvoudig is om bestaande HPLC-methoden te gebruiken, kan het complex zijn om problemen op te lossen of om nieuwe methoden te ontwikkelen. Dit komt grotendeels door de reeks verschillende modules, kolommen en mobiele fasen.

Gevoeligheid en resolutie

Over het algemeen is HPLC veelzijdig en uiterst precies als het gaat om het identificeren en kwantificeren van chemische componenten. Met veel stappen betrokken, is de precisie van HPLC grotendeels te wijten aan het proces dat wordt geautomatiseerd en daarom zeer reproduceerbaar. HPLC heeft een lage gevoeligheid voor bepaalde verbindingen en sommige kunnen niet worden gedetecteerd omdat ze onherroepelijk worden geadsorbeerd. Vluchtige stoffen worden beter gescheiden door gaschromatografie