Een van de klassieke manieren om de concentratie van microben in een monster te bepalen, is door het monster te verdunnen, de microben op platen te laten groeien en de kolonies te tellen. De geplateerde microben groeien van een kolonievormende eenheid bestaande uit een of meer cellen tot een zichtbare kolonie die kan worden gezien en geteld. Bacteriën zijn de meest voorkomende microbe om te beoordelen met behulp van plaattellingen. Kolonieaantallen worden gebruikt om microben in bodem, water en voedsel te detecteren en te tellen. Protocollen voor het tellen van kolonies benadrukken een nauwkeurige en methodische aanpak.

Verdunbare monsters, plating en incubatie

Als u eenvoudig een microbemonster op een agarplaat uitsmeert, ziet u zoveel kolonievormende cellen eenheden die de individuele koloniën zullen samenvloeien, waardoor ze onmogelijk kunnen tellen. Om dit probleem op te lossen, mengt u het monster in een vloeibaar medium, neemt u een kleine hoeveelheid van dat mengsel en verdunt u het verder. Herhaal dit proces zes tot tien keer. Verspreid de laatste verdunning op een agarplaat en incubeer deze gedurende vier tot zeven dagen voordat u de koloniën telt.

Handmatig tellen

De primaire truc bij het tellen van kolonies is om elke koloniepunt een keer te tellen. Eén benadering is om de petrischaal op een rasterachtergrond in te stellen en de kolonies in elke rastercel te tellen, waarbij ze in een methodisch patroon door alle cellen bewegen. Het markeren van getelde kolonies op de achterkant van de petrischaal kan ook een nuttige benadering zijn. Over het algemeen moet u ten minste drie platen tellen; gebruik alleen platen met 30 tot 300 kolonies om robuuste conclusies te trekken, suggereert het Microbiology Network, een bedrijf dat consultancydiensten levert aan laboratoria en fabrikanten. Platen met kolonies die te talrijk zijn om te tellen of met te weinig kolonies moeten opnieuw worden geplateerd vanuit een nieuwe verdunning.

Geautomatiseerd tellen

Menselijke fout draagt ​​bij aan de tijd die gemoeid is met het handmatig tellen van kolonies . Om zowel nauwkeurigheid als efficiëntie te verbeteren, plaatst u de petrischaal in een geautomatiseerd kolonie-telapparaat. Geautomatiseerde kolonietellers nemen een afbeelding van de schotel, scheiden de kolonies van de achtergrond en gebruiken vervolgens een algoritme om de koloniën op de plaat te tellen. De algoritmen kunnen problemen hebben met het differentiëren van kolonies wanneer twee of meer koloniën de randen raken, dus dit is een gebied van voortdurende softwareontwikkeling.

Tellen ingewikkelder maken

De nauwkeurigheid van het berekenen van de dichtheid van microben van kolonietellingen heeft enkele beperkingen. Kolonie-vormende eenheden kunnen een enkele cel, een keten van cellen of een hele groep cellen zijn. De aanname is dat een kolonie één cel vertegenwoordigt, dus concentraties berekend op basis van kolonietellingen kunnen laag zijn. Verschillende microben hebben verschillende groeicondities nodig, en de kolonies op de plaat vertegenwoordigen alleen die microben die op die groeimedia onder die incubatieomstandigheden gedijen. Bovendien registreert kolonie-telling geen dode cellen, een belangrijke overweging wanneer u de concentratie cellen in het oorspronkelijke monster nodig heeft.