Door Nitu Bansal | Bijgewerkt op 24 maart 2022

TA-klonen biedt een eenvoudige, restrictievrije aanpak voor het subkloneren van PCR-producten. De techniek maakt gebruik van de complementaire combinatie van thymine en adenine, waardoor directe ligatie mogelijk is zonder de noodzaak van restrictie-enzymen. PCR-amplificatie wordt doorgaans uitgevoerd met Taq-polymerase, dat een enkele 3′-adenine-overhang aan elke DNA-streng toevoegt.

Methode

Bij TA-klonen bevat een gelineariseerde vector, bekend als een T-vector, enkele 3′-T-overhangen. Het PCR-product, dat 3′-A-overhangen draagt, wordt in een hoge molaire verhouding met de T-vector gemengd. Vervolgens wordt T4-DNA-ligase aan het mengsel toegevoegd, waardoor de complementaire AT-paren kunnen hybridiseren en worden afgedicht, wat resulteert in een recombinant plasmide.

Voor- en nadelen

Pluspunten:

• Snel en eenvoudig protocol:geen restrictie-enzymen vereist.
• Ideaal voor het klonen van fragmenten zonder geschikte restrictieplaatsen.
• Hoge ligatie-efficiëntie bij gebruik van hoogwaardige T-vectoren.

Nadelen:

• Commerciële kits kunnen kostbaar zijn, waardoor het wijdverbreide gebruik wordt beperkt.
• Niet-directioneel klonen vergroot de kans op omkering van de wisselplaatoriëntatie.

TA-kloneringskits

Toonaangevende fabrikanten leveren kant-en-klare TA-kloonkits, waaronder Invitrogen, QIAGEN en Premier Biosoft. Deze kits bieden vooraf voorbereide T-vectoren en geoptimaliseerde ligatiereagentia om de workflow te stroomlijnen.