Science >> Wetenschap >  >> Biologie

Waarom wordt het totale eiwit gemeten bij 595 nm in Bio-Rad-test?

De Bio-Rad-eiwitbepaling (ook bekend als de Bradford-test) meten het totaal niet van het totale eiwit bij 595 nm. Het is een colorimetrische test waarbij de absorptie wordt gemeten bij 595 nm . Dit is waarom:

* Coomassie Brilliant Blue G-250 kleurstof: De test gebruikt deze kleurstof, die bindt aan eiwitten. Deze binding verandert de structuur van de kleurstof en veroorzaakt een verschuiving in het absorptiespectrum.

* kleurverandering: Wanneer de kleurstof bindt aan eiwitten, verandert deze van kleur van bruin naar blauw. Deze blauwe vorm heeft een maximale absorptie bij 595 nm.

* Kwantificering van eiwitten: De intensiteit van de blauwe kleur is recht evenredig met de aanwezige hoeveelheid eiwitten. Door de absorptie bij 595 nm te meten, kunnen we de eiwitconcentratie kwantificeren.

Samenvattend:

* De Bio-Rad-test maakt gebruik van Coomassie Brilliant Blue G-250 kleurstof om te binden aan eiwitten.

* De gebonden kleurstof wordt blauw en absorbeert maximaal bij 595 nm.

* Absorptie bij 595 nm wordt gemeten om de eiwitconcentratie te bepalen.

Hoewel de absorptie wordt gemeten bij 595 nm, is dit daarom niet het totale eiwit dat direct wordt gemeten, maar de kleurverandering veroorzaakt door de kleurstofbinding aan eiwitten.