Een eiwit-overexpressieprotocol verwijst naar elke methode om een ​​organisme ertoe te brengen een gewenst eiwit in voldoende hoeveelheid te maken voor verder onderzoek. Wetenschappers gebruiken vaak bacteriën en gist om hun specifieke eiwit van belang te maken, maar in theorie zou elk organisme kunnen werken.

Betekenis

Om de structuur of functie van een bepaald eiwit te bestuderen, heb je om een ​​aanzienlijke hoeveelheid beschikbaar te hebben voor de door u gewenste tests. Sommige eiwitten komen van nature in grote hoeveelheden voor en zuiveren gemakkelijk van hun gastheerorganisme. De meeste eiwitten komen echter in zeer kleine hoeveelheden voor of komen voor in organismen waarvan eiwitten niet gemakkelijk kunnen worden gezuiverd. Proteïne-overexpressieprotocollen genereren grote hoeveelheden gewenste eiwitten voor verdere studie, waardoor wetenschappers lage hoeveelheden, zeldzame, toxische en zelfs gemuteerde eiwitten kunnen bestuderen.

Proteïne-expressie |

Veel voorkomende organismen die worden gebruikt in protocollen voor overexpressie omvatten bacteriën of gist. Wetenschappers manipuleren deze organismen om een ​​gen te dragen dat codeert voor een gewenst eiwit. Ze plaatsen het gen onder specifieke controle zodat het organisme het gewenste eiwit niet tot expressie brengt of tot het specifiek wordt geïnduceerd om dit te doen. Wetenschappers kunnen bijvoorbeeld een organisme manipuleren om een ​​gen onder directe controle van een specifieke suiker te dragen. Bij afwezigheid van die specifieke suiker groeit het organisme maar kan het eiwit niet maken. In de aanwezigheid van de suiker maakt het organisme veel van het eiwit.

Overwegingen

Veel verschillende overexpressieprotocollen werken, maar moeten worden geoptimaliseerd voor een specifiek eiwit en organisme. Optimalisatie vereist meestal vallen en opstaan ​​en hangt vaak af van de structuur en functie van het eiwit. Overexpressie van sommige eiwitten kan het organisme dat het eiwit maakt doden. In dit geval moet u mogelijk wachten tot de populatie van het organisme groot genoeg is voordat u de productie van dat eiwit induceert. Veranderende organismen of veranderende types van hetzelfde organisme kunnen ook helpen.