* NAD+ moet een oxidatiemiddel zijn: NAD+ moet een hogere affiniteit hebben voor elektronen dan het molecuul dat het oxideert. Dit betekent dat het meer elektronegatief moet zijn en een grotere neiging moet hebben om elektronen te winnen.

* Het geoxideerde molecuul moet een reductiemiddel zijn: Het molecuul dat wordt geoxideerd (zoals glucose) moet een lagere affiniteit voor elektronen hebben dan NAD+. Dit betekent dat het elektropositiever moet zijn en een grotere neiging moet hebben om elektronen te verliezen.

* De reactie moet energetisch gunstig zijn: De overdracht van elektronen van het molecuul dat wordt geoxideerd naar NAD+ moet energie vrijgeven. Dit zorgt ervoor dat de reactie spontaan kan verlopen.

In wezen fungeert NAD+ als een elektronenacceptor, die elektronen accepteert uit een molecuul met een hoger energieniveau (zoals glucose) en gereduceerd tot NADH. Dit proces is cruciaal voor veel metabole routes, waaronder glycolyse en de citroenzuurcyclus.