Hier is hoe het werkt:

* Beperkingsenzymen: Deze enzymen worden gebruikt om zowel het plasmide -DNA als het belang van interesse bij specifieke sequenties te snijden, waardoor plakkerige uiteinden ontstaan (complementaire overhangen).

* Ligase -enzym: Dit enzym werkt als "moleculaire lijm" en sluit zich aan bij de plakkerige uiteinden van het gen en het plasmide samen, waardoor een recombinant plasmide wordt gevormd.

De meest voorkomende ligase die in moleculaire biologie wordt gebruikt, is T4 DNA -ligase .