Escherichia coli, E. coli, is een bacterie die groeit in de onderste darmen van zoogdieren. Deze bacterie werd voor het eerst ontdekt in de late 1800's. Sindsdien heeft het een lange geschiedenis van gebruik in wetenschappelijk onderzoek. Het is het meest gebruikte organisme in de moleculaire genetica. Een deel van de reden dat E. coli veel wordt gebruikt in wetenschappelijk onderzoek, is dat het gemakkelijk is om in een laboratorium te groeien. De factoren die E. coli gemakkelijk maken om te groeien, zijn de eenvoudige voedingsbehoeften, de snelle groeisnelheid en de matige onderhoudsvereisten.

Steriliseer de inoculatielus door deze in de vlam van de bunsenbrander te plaatsen. Steek de onderste helft van de lus door de vlam totdat deze rood oplicht.


Laat de lus afkoelen. Je kunt het aanraken met de steriele agar op de plaat om te controleren of deze is afgekoeld. Plaats de lus niet op de tafel en laat hem niet in contact komen met iets anders dan steriele agar of de gewenste cultuur nu deze is gesteriliseerd.


Dompel de lus in de E. coli-cultuur en verwijder deze.


Open de agarplaat en schuif de lus voorzichtig heen en weer over het oppervlak van een deel van de agar. Zorg ervoor dat je niet door de agar krabt met de lus. De agar levert de voedingsstoffen die de E. coli nodig heeft om te groeien.


Plaats de lus opnieuw in de bunsenbrander om deze te steriliseren. Zodra de lusstaaf is afgekoeld, raakt u deze aan op een steriel gedeelte van de plaat om ervoor te zorgen dat deze koel is en glijdt u de lus door uw eerste streep om een tweede streep te maken. Deze tweede reeks is een verdunde versie van de eerste reeks. Herhaal dit sterilisatie- en glijproces totdat verschillende delen van de agar-plaat zijn overgeschoven. De reden dat je dit doet, is dat je later kunt kiezen uit enkele, klonale kolonies. Dit zal helpen ervoor te zorgen dat je ten minste één sectie hebt met individuele kolonies - niet te geconcentreerd (die te veel groei zal hebben en je niet in staat stelt om uit een enkele kolonie te kiezen) en niet te verdund (wat geen kolonies zou geven) .


Steriliseer de lus nog een laatste keer in de vlam voordat u deze opzij legt in het werkgebied.


Plaats de bovenkant terug op de agarplaat. Draai de plaat ondersteboven en plaats deze in de incubator ingesteld op 37 graden Celsius (98,6 graden Fahrenheit). Deze ideale incubatietemperatuur simuleert de temperatuur van het menselijk lichaam waar E. coli woont. Binnen 24 tot 48 uur verschijnen zichtbare kolonies van E. coli-bacteriën in de agarplaat.




Waarschuwingen


1. Juiste insluiting van de E. coli-monsters en sterilisatie van de inentingslus verkleint de kans op verspreiding van de bacteriën. In het experimentgebied mag geen eten of drinken worden geconsumeerd. Het dragen van handschoenen zal het risico op handbesmetting verder verminderen.