Dit proces gebeurt tijdens de eerste stap van de Calvin-cyclus, het lichte-onafhankelijke stadium van fotosynthese:

1. Koolstoffixatie: Het enzym Rubisco voegt een koolstofdioxidemolecuul toe aan RUBP. Deze onstabiele zes-koolstofverbinding splitst zich onmiddellijk in twee moleculen van 3-PGA.

Deze reactie is cruciaal omdat het anorganische koolstof (CO2) in een organisch molecuul opneemt, waardoor koolstof effectief wordt "bevestigd" in een vorm die door de plant bruikbaar is.